hTERT启动子的克隆及其在端粒酶阳性肺癌细胞中的靶向转录活性研究

王艳萍; 唐小军; 陈晓禾; 车国卫; 朱大兴; 孙芝琳; 周清华

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目的克隆人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子序列片段,并探讨hTERT启动子在肿瘤细胞中的靶向转录活性。方法用PCR方法克隆293细胞DNA hTERT 5′端上游旁侧序列长约1.1 kb的启动子片段,经测序无误后将其克隆入荧光素酶报告质粒pGL 3-B as ic的荧光素酶基因上游,构建pGL 3-hTERT p重组质粒,瞬时转染肺癌细胞A 549、SPC-A-1、LTEPα-2、NC I-H 446、YTM LC-9、GLC-82、95D、A 2以及正常成纤维细胞M RC-5,检测荧光素酶活性。并用RT-PCR和TRAP-EL ISA方法分析各细胞hTERT mRNA的表达及其端粒酶活性。结果琼脂糖电泳显示PCR克隆的hTERT启动子片段长约1.1 kb,DNA测序结果与G enB ank中hTERT启动子DNA序列完全一致,位于hTERT基因转录起始位点上游1126 bp(-1126^-40),片段长度为1084 bp;采用双酶切和PCR两种方法鉴定pGL 3-hTERT p重组质粒,均显示构建成功;hTERT mRNA和端粒酶活性在肺癌细胞中呈不同水平的表达,而正常细胞则均为阴性;瞬时转染及荧光素酶活性检测实验显示,hTERT启动子片段在所有检测的肺癌细胞中均有高低不同的转录活性,在正常细胞M RC-5无转录活性。结论克隆的1084 bp大小的hTERT启动子片段在hTERTmRNA和端粒酶阳性的肺癌细胞中有特异性的转录活性,hTERT启动子可能作为靶向性基因治疗的调控元件。

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来源
《四川大学学报：医学版》 |2006年第4期|497-501|共5页
作者
王艳萍; 唐小军; 陈晓禾; 车国卫; 朱大兴; 孙芝琳; 周清华;
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作者单位

四川大学华西医院肺癌分子生物实验室;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类转化及克隆;肺肿瘤;
关键词
人端粒酶催化亚单位; 启动子; 靶向转录; 肺癌;

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