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鸡催乳素受体胞外域的分子克隆及原核表达

         

摘要

根据家鸡催乳素受体基因胞外域序列(GenBank号:D13154)设计并合成1对覆盖编码区58~1 249位核苷酸的引物,以家鸡垂体总RNA为模板,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获得了特异性片断,将该片断克隆入pMD18-T载体并转化感受态细菌E.coli DH5α永久保存.通过设计第2对引物扩增PRLR胞外域cDNA片段,该片段经酶切后克隆到表达载体pRSET A的EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ两酶切位点之间,构建重组质粒pR-PRLR.该质粒在转化感受态细菌E.coli BL21(DE3)后,在IPTG诱导下促使重组菌表达了相对分子质量为53 640左右的重组融合蛋白,表达量在0.1 mmol/L IPTG诱导5 h时达到最高,约占总菌体蛋白的17.6%左右.表达产物可经体积分数为50%的Ni-NTA凝胶纯化,说明重组蛋白中具有正确的His-tag标签及之后的鸡催乳素受体编码区胞外域序列.

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