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circRIPK2在鸡骨骼肌细胞增殖分化中的调控作用

         

摘要

[目的]探索circRIPK2在鸡骨骼肌生长发育中的功能及作用机制.[方法]依据反向剪切位点设计收敛、发散引物,并结合Sanger测序验证circRIPK2的环形结构.利用RT-PCR探究不同发育时期circRIPK2的表达水平.通过构建过表达载体,结合EdU、流式细胞术和RT-PCR,探究circRIPK2对鸡原代成肌细胞增殖分化的影响.[结果]PCR电泳结果及Sanger测序证明circRIPK2环化位点真实存在.RT-PCR结果表明,和对照组相比,过表达circRIPK2后,对细胞增殖有抑制作用的标记基因p21的mRNA表达上调20%,对细胞增殖有促进作用的标记基因Cyclin B2、Cyclin D1、Cyclin D2和PCNA的mRNA表达分别下调39%、22%、29%和45%;肌分化标记基因MyHC、MYOG和Myomaker的mRNA表达分别上调了39%、56%和25%.EdU检测细胞增殖和流式细胞术检测细胞周期变化的结果表明,circRIPK2抑制细胞增殖进程.[结论]circRIPK2可能通过抑制成肌细胞增殖、促进成肌细胞分化,从而影响鸡骨骼肌的生长发育过程.

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