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水产品中4种食源性致病菌多重PCR检测方法的建立

         
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[目的]建立能同时检测沙门氏菌、大肠杆菌O157∶H7、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR,为水产品质量安全检测工作提供技术支持.[方法]以LB肉汤培养基为共增菌培养基,根据沙门氏菌invA基因、大肠杆菌O157∶H7 rrbE基因、志贺氏菌ipaH基因和金黄色葡萄球菌femA基因的保守序列设计引物,对引物浓度配比、退火温度及反应体系等进行优化,并对建立的多重PCR进行特异性、敏感性及临床样品检验试验.[结果]4种目标致病菌在LB肉汤培养基中36℃培养18h后,均表现出良好的生长趋势,增菌数量级均在108 CFU/mL以上.优化后的多重PCR能对4种目标菌的单一或混合基因组DNA进行特异性扩增,而对单增李斯特氏菌、肺炎克雷伯菌、副溶血性弧菌、创伤弧菌、霍乱弧菌等其他菌株的基因组DNA均未扩增出任何条带;对沙门氏菌、大肠杆菌O157∶H7和金黄色葡萄球菌的最低检出限为102 CFU/mL,对志贺氏菌最低检出限为10 CFU/mL.应用该多重PCR对56份水产品进行检测,其结果与按照GB/T 4789-2003、GB/T 4789-2010检测的结果一致.[结论]针对同时检测沙门氏菌、大肠杆菌O157∶H7、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌的多重PCR具有快速、便捷、灵敏、准确等优点,可为水产品食源性致病菌检测及其安全控制行业提供一种快速、准确、高效、经济的检测手段.

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