端粒酶基因的腺病毒包装条件优化及其活性功能验证

HE Xiao-ying; JING Qian-ge; JIANG Xin-ying; YUAN Ting; WU Xian; TONG Rui-ying; WANG Jing-yan; MA Li-bing

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[目的]构建携带人类端粒酶催化亚基基因(hTERT)的腺病毒载体并优化其包装条件,为进一步探究端粒酶与细胞重编程调控间的作用机理提供参考依据.[方法]利用腺病毒载体pAdEasy-1构建携带hTERT基因的重组腺病毒载体,分别采用脂质体法和电转法及不同浓度胎牛血清在HKE293A细胞中进行包装,筛选出最佳病毒包装条件,收集重组腺病毒rAd-hTERT并体外感染小鼠胎儿成纤维细胞,验证重组腺病毒rAd-hTERT的活性功能.[结果]以腺病毒载体pAdEasy-1为骨架质粒,成功构建获得携带hTERT基因的重组腺病毒载体(pAd-hTERT),其最佳病毒包装条件是采用脂质体法结合15％胎牛血清,此条件下收集获得的病毒滴度最高(1×1011 IFU/mL).以携带hTERT基因的腺病毒rAd-hTERT感染小鼠胎儿成纤维细胞72 h后,可扩增出片段大小约3450 bp的目的基因条带,即hTERT基因在小鼠胎儿成纤维细胞中成功表达.[结论]采用脂质体法结合15％胎牛血清包装获得的携带hTERT基因重组腺病毒具有较高病毒滴度,感染小鼠胎儿成纤维细胞能成功表达hTERT基因,进一步证实端粒酶具有蛋白功能的生物学活性.

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来源
《南方农业学报》 |2019年第6期|1356-1361|共6页
作者
HE Xiao-ying; JING Qian-ge; JIANG Xin-ying; YUAN Ting; WU Xian; TONG Rui-ying; WANG Jing-yan; MA Li-bing;
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作者单位

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正文语种 chi
中图分类繁殖生物技术;
关键词
端粒酶; 腺病毒; 细胞重编程; 载体构建; 病毒包装; 功能验证;

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