嗜肺军团菌pilE基因体外表达及其免疫原性研究

杨志伟; 陈建平; 王涛; 田玉; 刘德松

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嗜肺军团菌pilE基因体外表达及其免疫原性研究

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目的构建嗜肺军团菌Ⅳ型菌毛pilE基因的真核表达重组质粒pcDNA3.1-pilE,研究其真核细胞中的表达及其免疫原性.方法以嗜肺军团菌1型DNA为模板,PCR扩增获得嗜肺军团菌pilE基因,将其定向插入载体pcDNA3.1(+),构建真核表达重组质粒pcDNA3.1.-pilE.经限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,用脂质体法将重组质粒pcDNA3.1-pilE转染NIH3T3细胞,采用免疫荧光法和Western-blot分别鉴定pcDNA3.1-pilE的瞬时和稳定表达产物.将pcDNA3.1-pilE作为DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠体内抗原特异性抗体水平、脾淋巴细胞增殖活性、IFN-γ产生水平、CTL杀伤活性等指标,评价疫苗的免疫原性.结果扩增出了429 bp的PilE基因,在细胞膜与细胞内观察到较强的绿色荧光,在相对分子质量15000处检测到阳性杂交信号,表明pcDNA3.1-pilE在细胞内表达PilE蛋白.pcDNA3.1-pilE免疫组的免疫原性均高于对照组pcDNA3.1(+)组(P＜0.01).结论成功构建了嗜肺军团菌pilE基因的真核表达重组质粒,并在NIH3T3细胞中得到了表达,免疫小鼠后诱导了特异的体液免疫应答和细胞免疫应答.

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来源
《南方医科大学学报》 |2007年第2期|141-145|共5页
作者
杨志伟; 陈建平; 王涛; 田玉; 刘德松;
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作者单位

四川大学华西基础医学与法医学院寄生虫学教研室,四川,成都,610041;

四川大学华西基础医学与法医学院寄生虫学教研室,四川,成都,610041;

四川大学华西基础医学与法医学院寄生虫学教研室,四川,成都,610041;

四川大学华西基础医学与法医学院寄生虫学教研室,四川,成都,610041;

四川大学华西基础医学与法医学院寄生虫学教研室,四川,成都,610041;

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正文语种 chi
中图分类基础医学;
关键词
嗜肺军团菌; Ⅳ型菌毛蛋白; 免疫原性; 体外表达;

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