外周血PBMC来源的树突状细胞的快速无血清培养方法及细胞信号转导机制

吴军; 王晓怀; 杨德懋; 杨太成; 王捷; 陈政良

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外周血PBMC来源的树突状细胞的快速无血清培养方法及细胞信号转导机制

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目的探讨体外无血清条件下诱导人外周血单核细胞(PBMC)迅速生成树突状细胞(DC)的方法,并初步探讨钙离子载体(CI)诱导分化的信号转导途径与肿瘤坏死因子(TNF)-α所诱导的是否相同.方法分离健康献血者的PBMC,给予无血清培养基及50ng/ml的rhGM-CSF过夜培养后,再分别给予100ng/ml的A23187或50ng/ml的TNF-α,或预先加入0.5μg/ml的环胞菌素A(CsA)30min后,再加入A23187、TNF-α,共培养40h.于相差显微镜下观察细胞形态的变化,流式细胞仪检测细胞的表面标志,MTT比色法检测不同方法处理的PBMC刺激同种异体T细胞的增殖作用.结果健康献血者的PBMC在无血清条件下,给予rhGM-CSF及CI或TNF-α培养40h,均可获得DC的典型形态,包括CD14表达下调、CD83及共刺激分子(CD80、CD86)表达上调,以及较强刺激同种异体T细胞增殖的作用;上述由CI诱导的细胞形态的改变、表面分子的表达以及刺激T细胞增殖的作用均可被CsA所抑制.而TNF-α所诱导的细胞形态的改变、表面分子的表达以及刺激T细胞增殖的作用均不受CsA影响.结论健康献血者的PBMCs在体外无血清条件下,可以被rhGM-CSF及CI或TNF-α迅速诱导成DC,但CI与TNF-α诱导PBMC分化为DC的细胞信号转导途径不同.

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来源
《南方医科大学学报》 |2004年第11期|1263-1266|共4页
作者
吴军; 王晓怀; 杨德懋; 杨太成; 王捷; 陈政良;
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作者单位

南方医科大学免疫学教研室,广东,广州,510515;

广州军区广州总医院肿瘤分子生物学研究所,广东,广州,510010;

广州军区广州总医院肿瘤分子生物学研究所,广东,广州,510010;

广州军区广州总医院肿瘤分子生物学研究所,广东,广州,510010;

广州军区广州总医院肿瘤分子生物学研究所,广东,广州,510010;

南方医科大学免疫学教研室,广东,广州,510515;

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正文语种 chi
中图分类免疫病理学;
关键词
树突状细胞; 肿瘤坏死因子-α; 钙离子载体; 细胞信号转导;

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