沉默神经元HIF-1α和PTEN的表达对体外培养的大鼠神经元氧糖剥夺损伤的影响

唐静华; 杨颖; 陈洁; 李廷玉; 代英

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沉默神经元HIF-1α和PTEN的表达对体外培养的大鼠神经元氧糖剥夺损伤的影响

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目的利用RNA干扰技术分别沉默神经元中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和磷酸酶并和张力蛋白同源物(PTEN)基因,论证它们在神经元体外氧糖剥夺(OGD)损伤后的功能调控作用.方法构建并筛选靶向HIF-1α及PTEN基因的shRNA慢病毒载体;提取并将原代神经元分为4组:(1)NC组,仅加空载病毒;(2)NC+OGD组,加空载病毒后缺氧;(3)Si-hif-1α+OGD组,加Si-hif-1α病毒后缺氧;(4)Si-pten+OGD组,加Si-pten病毒后缺氧,均在培养第3天感染病毒,第7天OGD损伤模拟细胞缺氧.缺氧后24 h行荧光实时定量PCR(qRT-PCR)法检测干扰效率,行乳酸脱氢酶(LDH)检测及AnnexinV-FITC/PI检测神经元细胞损伤、凋亡变化,Western blot检测相应蛋白表达变化.结果慢病毒介导的shRNA能有效沉默目的基因mRNA的表达;HIF-1α沉默后,缺氧细胞的损伤及凋亡加重,PTEN蛋白的表达升高,p-PTEN、p-AKT、NR2A及VEGFa表达降低(P0.05).结论慢病毒介导的shRNA能有效沉默神经元HIF-1α及PTEN的表达,逆转神经元缺氧损伤中HIF-1α升高对PTEN活性的抑制,参与神经元损伤调控.

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来源
《南方医科大学学报》 |2021年第12期|1795-1800|共6页
作者
唐静华; 杨颖; 陈洁; 李廷玉; 代英;
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作者单位

重庆医科大学附属儿童医院儿童保健科//国家儿童健康与疾病临床医学研究中心//儿童发育疾病研究教育部重点实验室//儿童营养与健康重庆市重点实验室重庆 400014;

重庆医科大学附属儿童医院儿童保健科//国家儿童健康与疾病临床医学研究中心//儿童发育疾病研究教育部重点实验室//儿童营养与健康重庆市重点实验室重庆 400014;

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重庆医科大学附属儿童医院儿童保健科//国家儿童健康与疾病临床医学研究中心//儿童发育疾病研究教育部重点实验室//儿童营养与健康重庆市重点实验室重庆 400014;

重庆医科大学附属儿童医院儿童保健科//国家儿童健康与疾病临床医学研究中心//儿童发育疾病研究教育部重点实验室//儿童营养与健康重庆市重点实验室重庆 400014;

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正文语种 chi
中图分类
关键词
缺氧; HIF-1α; PTEN-PI3K/AKT信号通路; RNA干扰;

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