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人脾脏巨噬细胞的分离与纯化

         

摘要

目的探索分离纯化大量人脾脏巨噬细胞(MΦ)的方法.方法选取10例手术切除的脾脏,机械研磨法获得脾脏组织细胞混悬液.采用贴壁培养的方法进行MΦ的分离与纯化,相差显微镜下动态观察,明确贴壁培养的合适时间,详细记录MΦ分离纯化过程各步骤所需时间.收获的MΦ,台盼蓝染色判定活力并计数,统计出平均每克脾脏组织收获的MΦ数及其纯度.相差显微镜、透射电镜观察分离纯化MΦ的形态特征.结果分析贴壁培养各时间段的细胞纯度及活力,确定MΦ培养的合适时间为2~3h.贴壁培养纯化后,平均从每克脾脏组织可收获(0.25±0.03)×108个MΦ,纯度为(90±5)%,细胞活力≥99%,细胞结构及各种细胞器结构均完整.结论贴壁培养方法分离纯化人脾脏MΦ是成功可行的,收获的MΦ数量大、纯度高、活力好,为脾脏MΦ功能的深入研究奠定了基础.

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