南极假丝酵母脂肪酶B在毕赤酵母的表达及酶学性质研究

孙金鹏; 钱圣一; 敬科举; 卢英华

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南极假丝酵母脂肪酶B在毕赤酵母的表达及酶学性质研究

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为提高南极假丝酵母脂肪酶B（Candida antarcticalipase B,CALB）的表达量,根据毕赤酵母（Pichia pastoris）密码子偏好性设计合成CALB基因,插入表达载体pPIC9K构建重组质粒pPIC9K-CALB.重组质粒转化毕赤酵母GS115,经过G418抗性筛选得到多拷贝转化子.摇瓶发酵120 h后上清液酶活力达到46 U/mL,通过金属螯合层析纯化发酵液将CALB纯化了5.23倍,比活力达到856.7 U/mg,去糖基化实验显示重组CALB比野生型CALB大5 ku.实验考察了不同反应温度、pH值和金属离子对重组CALB活性和稳定性的影响,发现重组CALB最适反应温度和pH分别为30℃和6.5,在pH 5.0~8.0之间以及40℃以下有较好稳定性,金属离子（10 mmol/L）Ca2＋,Zn2＋,Mn2＋有助于CALB酶活力的提高,而Cu2＋,Ag＋,Fe3＋强烈抑制酶催化反应.

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来源
《厦门大学学报：自然科学版》 |2011年第4期|765-771|共7页
作者
孙金鹏; 钱圣一; 敬科举; 卢英华;
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作者单位

厦门大学化学化工学院;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类目的基因的获得;
关键词
南极假丝酵母脂肪酶B; 毕赤酵母; 分泌表达; 酶学性质;

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