黄粉甲抗冻蛋白TmAFP72在毕赤酵母中的克隆、表达及理化性质

郭娟; 姚朝阳; 邵强

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目的通过对黄粉甲抗冻蛋白TmAFP72进行基因克隆、表达,获得目的蛋白并分析该蛋白在不同条件下的理化性质.方法聚合酶链反应(PCR)扩增目的基因afp72,克隆到pUCm-T载体中测序并保存.双酶切法将afp72基因定向重组到毕赤酵母表达载体pPIC9K中.将重组质粒转化入毕赤酵母GS115,筛选出重组菌株.用甲醇诱导目的蛋白表达,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染鉴定.用细菌抗冻法检测抗冻蛋白在不同酸碱条件下的活性,及经100℃不同热处理时间下的抗冻活性.结果 PCR扩增获得目的基因片段afp72,克隆质粒pUCm-T与afp72重组获得了质粒pUCm-T-afp72.成功构建了真核表达载体pPIC9 K-afp72,抗冻蛋白TmAFP72经诱导后获得表达.TmAFP72在较广的pH范围和较高的温度内均具有稳定性.结论真核表达载体pPIC9 K-afp72成功构建,并表达出目的抗冻蛋白TmAFP72,为扩大生产规模及深入研究该抗冻蛋白的性质和应用奠定基础.

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来源
《新乡医学院学报》 |2013年第10期|794-797,800|共5页
作者
郭娟; 姚朝阳; 邵强;
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作者单位

郑州人民医院检验科,河南郑州450003;

新乡医学院基础医学院,河南新乡453003;

河南师范大学生命科学学院,河南新乡453000;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类转化及克隆;
关键词
抗冻蛋白; 真核表达; 毕赤酵母,抗冻活性;

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