基于SYBR Green Ⅰ的茎-环Real-time PCR定量检测miRNA-7方法的建立

赵娟娟; 徐华林; 陶弋婧; 郭萌萌; 周涯; 陈超; 秦娜琳; 郑静; 田丹; 徐林

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基于SYBR Green Ⅰ的茎-环Real-time PCR定量检测miRNA-7方法的建立

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目的本研究旨在利用常规荧光燃料SYBR GreenⅠ,通过茎-环法设计原理,建立有效检测微小RNA-7(miR-7)的Real-time PCR方法。方法利用miRBase数据库获得miR-7的成熟体序列,分别设计1条miR-7特异性反转录引物,以及Real-time PCR上游和下游引物;观察不同退火温度和不同引物浓度对扩增miR-7的Ct值影响,选择最优的退火温度和引物浓度;测定不同稀释度RNA下Real-time PCR扩增miR-7的效果;并利用该方法检测小鼠4个器官中miR-7的灵敏性和特异性。结果在基于SYBR GreenⅠ的茎-环Real-time PCR检测法中,miR-7扩增的最优退火温度为60℃,最优引物浓度为10μmol/L;在不同稀释度RNA下miR-7的Ct值线性关系较好,且在模板RNA低于100 pg的条件下,该方法仍可有效检测miR-7分子;最后有效检测出小鼠4个不同器官中miR-7的差异性表达。结论成功建立基于SYBR GreenⅠ的茎-环Real-time PCR定量检测miRNA-7的方法,可为后续研究miR-7的生物学功能提供了重要工作基础。

著录项

来源
《遵义医科大学学报》 |2015年第6期|636-641|共6页
作者
赵娟娟; 徐华林; 陶弋婧; 郭萌萌; 周涯; 陈超; 秦娜琳; 郑静; 田丹; 徐林;
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作者单位

遵义医学院免疫学教研室暨贵州省生物治疗人才基地;

贵州省普通高等学校特色药物肿瘤防治特色重点实验室;

遵义医学院医学物理学教研室;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类免疫学技术、设备及实验方法;
关键词
茎-环Real-time; PCR法; SYBR; GreenⅠ; 微小RNA-7; 表达;

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