胆汁中外泌体及外泌体RNA提取方法比较

王有礼; 谭明娟; 葛贤秀

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cqvip:目的比较超速离心法和聚合沉淀法分离胆汁外泌体及外泌体RNA的差异。方法收集2017年6月至2018年12月在南京医科大学第二附属医院消化内科行内窥镜逆行胆囊-胰腺造影术(ERCP)患者术中胆汁,分别采用超速离心法和聚合沉淀法对胆汁进行分离。采用透射电镜法观察提取外泌体的形态;采用粒径分析所得粒子的直径;采用流式细胞术检测表面标记物CD63和CD81的表达差异;Trizol法提取RNA,分析RNA水平及A260/A280;采用实时荧光定量(RT-PCR)检测4种miRNA表达,分析两种方法所得平均CT值的差异。结果超速离心法和聚合沉淀法所得外泌体形态和粒径分布无明显差异;流式细胞术分析显示,超速离心法所得外泌体CD63和CD81阳性率较高。RNA分析显示,聚合沉淀法提取RNA水平较高,检测的miR-671-5p、miR-126-3p、miR-210-3p、miR-483-5p平均CT值较小。结论超速离心法和聚合沉淀法均可提取出一定数量的外泌体,其中超速离心法得到的RNA较纯,而聚合沉淀法得到的RNA水平较高,可用于稀缺标本的检测。因此,进一步寻找高敏感、高特异、经济便捷的方法仍然十分必要。

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来源
《检验医学与临床》 |2019年第23期|3405-3409|共5页
作者
王有礼; 谭明娟; 葛贤秀;
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作者单位

南京医科大学附属南京医院/南京市第一医院检验科江苏南京210006;

南京医科大学第二附属医院消化科江苏南京210011;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类核糖（醣）核酸（RNA）;
关键词
胆汁; 外泌体; 核糖核酸; 超速离心; 聚合沉淀;

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