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人免疫缺陷病毒I型Vif蛋白的原核表达、纯化及单克隆抗体制备

         

摘要

目的:克隆、表达、纯化人免疫缺陷病毒I型(HIV-1)vif蛋白,制备其单克隆抗体.方法:提取感染了HIV的细胞基因组DNA,PCR扩增vif基因,插入表达载体pET32a,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得工程菌株,IPTG诱导蛋白表达,Westem印迹鉴定目的蛋白,亲和层析纯化目的蛋白;免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体.结果:构建了Vif蛋白的原核表达载体vif-pET32a,并在大肠杆菌中获得高表达,目的蛋白以包涵体形武存在;纯化获得高纯度的重组Vif蛋白,蛋白浓度可达0.56mg/mL;建立了抗Vif蛋白单克隆抗体细胞株,制备了腹水,滴度可达1:16x106,抗体纯化后保持了活性和特异性.结论:在原核表达系统中表达、纯化了重组Vif蛋白,制备了针对Vif蛋白的单克隆抗体,为研究Vif蛋白的功能和抗原性奠定了基础.

著录项

  • 来源
    《生物技术通讯》 |2009年第4期|475-478|共4页
  • 作者单位

    军事医学科学院,微生物流行病研究所,全军艾滋病检测中心,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071;

    军事医学科学院,微生物流行病研究所,全军艾滋病检测中心,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071;

    军事医学科学院,微生物流行病研究所,全军艾滋病检测中心,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071;

    军事医学科学院,微生物流行病研究所,全军艾滋病检测中心,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071;

    军事医学科学院,微生物流行病研究所,全军艾滋病检测中心,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071;

    军事医学科学院,微生物流行病研究所,全军艾滋病检测中心,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071;

    军事医学科学院,微生物流行病研究所,全军艾滋病检测中心,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071;

    军事医学科学院,微生物流行病研究所,全军艾滋病检测中心,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071;

    军事医学科学院,微生物流行病研究所,全军艾滋病检测中心,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 基因工程(遗传工程);
  • 关键词

    人免疫缺陷病毒I型; Vif蛋白; 原核表达; 单克隆抗体;

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