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细胞穿透肽Tat-LK15介导siRNA的转染效率和细胞毒性研究

         
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通过与LipofectamineTM RNAiMAX (Lipo)比较,探讨细胞穿透肽Tat-LK15对人肾上皮细胞(human embryonic kidney 293T cells,293T)和大鼠视神经节细胞(retinal ganglion cell line,RGC-5)转染小干扰RNA (small interference RNA,siRNA)的效率和细胞毒性,为后期实验提供依据.以羧基荧光素(carboxyfluorescein,FAM)标记的siRNA为报告基因,不同剂量的Tat-LK15 (Tat-LK 15组)和Lipo (Lipo组)为转染试剂,分别转染293T和RGC-5细胞.转染24 h后荧光显微镜观察FAM荧光强度,计算转染效率,并以CCK-8法检测细胞毒性.随着Tat-LK15和Lipo剂量的增加,siRNA转染效率逐渐提高.当Tat-LK15与siRNA配比为2:1 (μg/μg)时,RGC-5细胞的转染效率达到最高((87.3±4.5)％),低于Lipo与siRNA配比为5:1 (μL/μg)时的最高转染效率((96.2±3.2)％(P＜0.05));作用于293T细胞时,两转染试剂的最高转染效率没有统计学差异(P＞0.05).转染试剂剂量增加,Lipo细胞毒性显著增加,而Tat-LK 15毒性无明显变化.转染效率最高时,Lipo(5μL)组293T和RGC-5的细胞存活率仅为((77.8±4.1)％,(73.4±7.7)％)显著低于Tat-LK15 (2:1)组同种细胞的存活率((91.0±3.7)％,(90.0±6.1)％)(P＜0.05).Tat-LK15可有效地转染siRNA,细胞毒性低,安全性突出,有一定的应用前景.

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