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沉默RALA基因表达对前列腺癌细胞的增殖、迁移及凋亡的影响

         

摘要

目的:利用小干扰RNA(siRNA)靶向RALA基因,使其表达受抑制后探讨对前列腺癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其可能的机制。方法:采用RT-PCR检测前列腺癌DU145、PC-3和LNCap细胞中RALA mRNA的表达水平。通过Lipofectamine^(TM)2000将RALA-siRNA转染体位培养的DU145细胞株,采用MTT法检测RALA-siRNA对DU145细胞株增殖的影响;Transwell实验检测RALA-siRNA对DU145细胞株迁移能力的影响;流式细胞术检测RALA-siRNA对DU145细胞株凋亡影响。应用RTPCR及Western blot方法检测沉默RALA基因后DU145细胞株中RALA的表达水平。结果:RT-PCR检测结果提示DU145细胞株中RALA mRNA的表达水平高于PC-3、LNCap细胞株,其相对表达水平分别为(0.83±0.02)、(0.37±0.07)和(0.41±0.01),差异均有统计学意义(P<0.05)。MTT检测结果显示,转染RALA-siRNA后DU145细胞株的增殖明显受抑制,与空白对照组及阴性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);Transwell实验结果显示,与空白对照组及阴性对照组相比较,RALA-siRNA组穿膜细胞数低于两者(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,RALA-si RNA组细胞凋亡率明显高于空白对照组及阴性对照组(P<0.05)。Western blot检测结果显示比较阴性对照组、空白对照组,RALA-si RNA组的RALA蛋白的表达明显受抑制(P<0.05)。结论:RALA基因在前列腺癌DU145细胞株中的表达水平较高,沉默RALA基因可使DU145细胞增殖、迁移能力受限,提示在前列腺癌治疗上,RALA可作为一个潜在的靶点。

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