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成人外周血来源的树突状细胞体外诱导方法

         
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目的:探讨从成人外周血中提取单核细胞经体外诱导为树突状细胞(DC)的方法.方法:采用密度梯度离心法和细胞贴壁法从成人新鲜血液中分离出树突状细胞的前体单核细胞,利用重组人白介素4(rhIL-4)重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)经体外诱导5 d后,加入浓度为75 ng/mL的重组人肿瘤坏死因子-a(TNF-a)培养2 d.观察细胞形态,并用流式细胞仪检测技术检测DC表面分子标志物CD80-FITC、CD83-PE和HLA-DR-APC的表达.结果:沉降6 h后洗去淋巴细胞后的DC细胞呈圆形,大小均一,表面较光滑,贴壁生长.诱导第3天,DC细胞形态明显改变,体积变大,单个细胞开始呈簇状集落生长,部分细胞呈半悬浮状态.第5天细胞集落现象明显.加入rhTNF-a后,诱导第7天DC细胞悬浮,单个散开.成熟DC细胞CD80-FITC、CD83-PE、HLA-DRAPC表达率分别为81.59％、67.37％、85.38％.结论:密度梯度离心和细胞贴壁法可从外周血可获得DC的前体单核细胞,通过rhIL-4、rhGM-CSF和rhTNF-a联合诱导可得到成熟的DCs.

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