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TGF-β1上调Smad3磷酸化对气道上皮细胞表达胸腺基质淋巴细胞生成素的促进作用及其机制

         
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目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)促进气道上皮细胞合成、分泌胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的作用及其机制,为治疗哮喘寻求新靶点.方法 体外培养人支气管上皮细胞(HBEc),传代后接种于6孔板中,待细胞生长至50％～70％时进行实验.研究1ng/ml TGF-β1刺激不同时间对HBEc中TSLP表达的影响时,按培养时间分为0、3、6、12、24、48h组.研究不同浓度TGF-β1刺激24h对HBEc中TSLP及其他蛋白表达的影响时,按TGF-β1浓度分为0、0.1、1、10ng/ml组.使用SB431542拮抗TGF-β1时共培养24h,根据处理因素不同分为空白对照组(培养基中不加处理因素)、TGF-β1组(加入1ng/ml TGF-β1)、TGF-β1+SB431542组(加入1ng/ml TGF-β1和10μmol/L SB431542).采用Western blotting检测细胞中TSLP、p-Smad3及Smad3蛋白的表达水平,实时荧光定量PCR检测细胞中TSLP mRNA的表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中TSLP的浓度.结果 随着与TGF-β1共培养时间的延长,HBEc中TSLP表达量逐渐增加,24h组TSLP蛋白质相对表达量(0.803±0.022)明显高于0h组(0.350±0.032,P<0.05),mRNA相对表达量也较0h组明显上升(4.957±0.391vs.1.002±0.086,P<0.05).1ng/ml TGF-β1组TSLP的mRNA转录水平(7.954±2.004)和蛋白表达水平(1.522±0.003)明显高于0ng/ml TGF-β1组(1.008±0.152、0.758±0.014,P<0.05),1ng/ml TGF-β1组细胞培养上清液中TSLP的浓度高于0ng/ml TGF-β1组(160.157±7.050vs.138.817±1.940,P<0.05).HBEc细胞中p-Smad3、Smad3及p-Smad3/Smad3比值随TGF-β1浓度上升而上升;TGF-β1组的p-Smad3/Smad3比值(1.116±0.049)高于空白对照组(0.214±0.094,P<0.05)及TGF-β1+SB431542组(0.808±0.063,P<0.05),TGF-β1组的TSLP蛋白相对表达量(1.186±0.045)高于空白对照组(0.712±0.052,P<0.05)及TGF-β1+SB431542组(1.016±0.030,P<0.05).结论 TGF-β1通过上调Smad3磷酸化促进气道上皮细胞表达TSLP,可以作为哮喘治疗的潜在方向.

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