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毕赤酵母蛋白质糖基化途径的改造

         
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【背景】以酵母为宿主生产的蛋白往往发生过糖基化,形成高甘露糖型的N-糖基化。高甘露糖型的结构易在人体中引起免疫反应,这是酵母不能用于绝大部分糖蛋白药物生产的主要限制因素。因此,构建表达人源糖基化糖蛋白的酵母底盘细胞将为糖蛋白药物的生产提供强有力的工具。库德里阿兹威氏毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)具有极强的抗逆性且生长迅速,是一种近年来备受关注的非典型性酵母,对其进行糖基化途径的改造将具有巨大的应用前景。【目的】对酵母N-糖基化途径的改造,首先要使其N-糖基化转变为Man5GlcNAc2核心结构,本研究对P.kudriavzevii的och1基因进行敲除并引入源自曲霉的msd S基因,以改变其分泌糖蛋白N-糖链的糖型结构。【方法】通过基因编辑对P.kudriavzevii的N-糖基化途径进行改造,获得P.kudriavzeviiΔura3Δoch1::msd S菌株,分析P.kudriavzeviiΔura3Δoch1::msd S菌株分泌糖蛋白上N-糖组的变化。【结果】与野生型P.kudriavzevii相比,P.kudriavzeviiΔura3Δoch1::msd S菌株分泌糖蛋白上的N-糖链中可检测到Man5GlcNAc2型糖链结构。【结论】通过敲除och1基因和引入曲霉msd S基因,可使P.kudriavzevii合成Man5GlcNAc2糖链结构,为后续糖基化途径的改造奠定了基础。

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