玉米联合固氮菌Kosakonia radicincitans GXGL-4A转座突变体系的构建

孙帅欣; 程杰杰; 陈云鹏

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[背景]长期以来,农业生产上过度施用化学氮肥造成了农田生态环境的破坏,引起土壤板结、次生盐渍化和重金属污染.此外,由于田间大量的氮素流失和淋溶导致水体富营养化和地下水污染,使得农产品硝酸盐含量超标,最终可能通过食物链危及人类的健康.因此,通过合理地开发和利用生物固氮菌,从而减少化学氮肥施用量,对于保护生态环境,促进农业的可持续生产具有十分重要的意义.[目的]对从玉米根部分离得到的联合固氮菌Kosakonia radicincitans GXGL-4A进行Tn5转座突变,从而创制大量的突变体,经筛选后应用于对固氮及其调控的分子机制和氮代谢调控网络解析等研究.[方法]以固氮菌K.radicincitans GXGL-4A为研究对象,通过PCR法克隆得到GXGL-4A菌株的亚硝酸还原酶基因nirBD.通过构建重组质粒pMOD-egfp-tet,并利用电击转化法将转座复合体导入GXGL-4A野生株,进行Tn5转座突变,从而获得大量突变菌株.[结果]筛选到4株亚硝酸盐还原酶活性显著降低的突变株,并克隆了突变株M36突变位点的侧翼序列.[结论]对玉米联合固氮菌K.radicincitans GXGL-4A进行Tn5转座突变是可行的,初步建立了该菌株稳定有效的插入突变技术体系.

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来源
《微生物学通报》 |2018年第8期|1711-1718|共8页
作者
孙帅欣; 程杰杰; 陈云鹏;
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作者单位

上海交通大学农业与生物学院农业部都市农业重点实验室上海200240;

上海交通大学农业与生物学院农业部都市农业重点实验室上海200240;

上海交通大学农业与生物学院农业部都市农业重点实验室上海200240;

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正文语种 chi
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关键词
Kosakonia radicincitans GXGL-4A; 亚硝酸还原酶; Tn5转座突变;

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