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枯草芽孢杆菌核黄素操纵子与ribC基因的修饰与遗传效应

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[目的]研究核黄素操纵子(rib)组成型高表达,以及ribC基因低水平表达对枯草芽孢杆菌过量合成核黄素的影响.[方法]在染色体原位修饰启动子,用mRNA稳定子替换mRNA前导区,使rib操纵子组成型高表达;修饰ribC基因的启动子,降低ribC基因的表达水平.采用qRT-PCR方法,表征基因的相对表达水平;通过摇瓶发酵,测定重组菌的生物量和核黄素产量,表征相关基因修饰所表现的遗传效应.[结果]用gsiB mRNA稳定子替换核黄素操纵子的mRNA前导区,使其相对表达水平提高了约1 500倍.ribC基因启动子-35区的首个碱基由“T”突变为“C”,使ribC基因的表达水平下降了97％以上.得到的重组菌株LX34在补加蔗糖20 g/L的LB培养基上摇瓶发酵36 h,可积累核黄素2.1 g/L,同时生物量没有明显下降.[结论]使用gsiB mRNA稳定子,能够有效地提高目标基因或操纵子的表达水平;启动子-35区首个碱基的点突变,能够有效降低ribC基因的表达水平;rib操纵子过量表达和ribC基因低水平表达,使细胞能够过量合成并积累核黄素.

著录项

来源
《微生物学通报》 |2015年第1期|9-16|共8页
作者
夏苗苗; 刘露; 班睿;
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作者单位

天津大学化工学院系统生物工程教育部重点实验室天津300072;

天津大学化工学院系统生物工程教育部重点实验室天津300072;

天津大学化工学院系统生物工程教育部重点实验室天津300072;

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正文语种 chi
中图分类
关键词
枯草芽孢杆菌; 核黄素; rib操纵子; ribC基因; mRNA稳定子;

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