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高产青霉素酰化酶巨大芽胞杆菌的诱变选育及产酶条件优化

         
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[目的]选育高产青霉素G酰化酶(PGA)工-业菌株.[方法]采用LiCl-紫外线复合诱变以及常压室温等离子体(ARTP)诱变技术对巨大芽胞杆菌(Bacillus megaterium) ATCC 14945进行处理.处理菌体涂平板后,将长出的菌落接种到液体培养基中,向培养6h后的二代菌液中添加终浓度为0.1％的苯乙酸,28℃、250 r/min条件下诱导培养40 h.对离心后获得的上清(粗酶液)采用NIPAB法测定PGA酶活力.以PGA酶活力最高的菌株为材料,对苯乙酸最佳添加量和最佳诱导时间进行优化,采用NIPAB法测定PGA酶活力.采用SDS-PAGE检测诱变前后巨大芽胞杆菌粗酶液中PGA的蛋白特性.[结果]从诱变菌落中筛选到PGA酶活力为39.60 U/mL的菌株12-4,酶活力比出发菌株提高了8.5倍.该菌株在液体培养6h后添加终浓度为0.2％的苯乙酸,继续培养50 h后,PGA酶活力可达78.45 U/mL,比出发菌株提高了16.8倍.诱变前后菌株培养液中的PGA蛋白均具α、β亚基;诱变后菌株PGA α亚基的量没有明显变化,β亚基的量明显增多;α、β亚基之间的蛋白条带明显增多.[结论]采用诱变技术可提高巨大芽胞杆菌PGA活性,获得的诱变菌株12-4及培养条件对PGA工业化生产具有重要价值.

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