硝磺草酮抗性菌株的筛选及抗性基因的克隆表达

黄彦; 夏冰洁; 崔中利

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硝磺草酮抗性菌株的筛选及抗性基因的克隆表达

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[目的]从采集的土壤中筛选出硝磺草酮的抗性菌株,并从中克隆对羟苯基丙酮酸双加氧酶抗性基因.[方法]以酪氨酸为唯一碳源,采用富集培养法筛选分离硝磺草酮抗性菌株,利用16S rRNA基因序列分析对菌株进行初步鉴定.通过PCR扩增获得其HHPD基因序列,构建pETH4表达载体并在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行异源表达.通过检测色素在440 nm处的吸收值分析菌株E.coli BL21 (DE3)-pETH4对硝磺草酮的抗性特性.[结果]在含10 mmol/L硝磺草酮和1 g/L酪氨酸的选择培养基上,分离得到7株硝磺草酮抗性细菌,1株为不动杆菌属,2株为无色杆菌属,4株为假单胞菌属.从抗性最佳的Pseudomonas sp.AM-H4中扩增得到 HPPD的基因片段为1 056 bp,其序列与Acinetobacter baumannii基因组中HPPD的基因序列相似性达到99％,341位点由天冬氨酸突变为丙氨酸.HPPD基因在大肠杆菌中实现异源表达,蛋白分子量大小约40 kD.菌株E.coli BL21(DE3)-pETH4在40 μmol/L硝磺草酮酪氨酸LB培养基中的色素吸收值显著降低,能够耐受高于200 μmol/L的硝磺草酮.[结论]克隆获得的HPPD具有良好的硝磺草酮抗性,将在新除草剂抗性作物选育中有一定的应用潜力.

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来源
《微生物学通报》 |2015年第10期|1895-1902|共8页
作者
黄彦; 夏冰洁; 崔中利;
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作者单位

南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点实验室江苏南京210095;

南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点实验室江苏南京210095;

南京农业大学生命科学学院农业部农业环境微生物工程重点实验室江苏南京210095;

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正文语种 chi
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关键词
硝磺草酮; 对羟基苯丙酮酸双加氧酶; 抗性菌株; 基因克隆与表达;

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