大肠杆菌Nissle1917 L-天冬酰胺酶Ⅱ基因在大肠杆菌BL21中的表达与抗肿瘤活性

梁毅偈; 孙运军; 胡胜标; 颜富; 张旭; 白利明; 张友明; 丁学知; 夏立秋

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[目的]从大肠杆菌Nissle 1917中获得L-天冬酰胺酶Ⅱ基因,并研究其抗肿瘤活性.[方法]以大肠杆菌Nisslel917基因组为模板PCR扩增L-天冬酰胺酶Ⅱ基因,克隆至可诱导表达载体pET28a上.将L-天冬酰胺酶Ⅱ表达载体pET28a-asp转化至大肠杆菌BL21(DE3)中并通过IPTG诱导表达,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和液相色谱-质谱(LC-MS)对表达的L-天冬酰胺酶Ⅱ进行鉴定,并通过镍柱亲和层析纯化收集表达出的L-天冬酰胺酶Ⅱ.用纯化定量以后的L-天冬酰胺酶Ⅱ作用小鼠乳腺癌4T1细胞、人肝癌Hep-3B细胞和人脐静脉内皮细胞HUVEC.[结果]来自于大肠杆菌Nissle 1917的L-天冬酰胺酶Ⅱ基因可在大肠杆菌BL21中高效表达并通过LC-MS得到鉴定,细胞毒性实验结果表明L-天冬酰胺酶Ⅱ对4T1细胞和Hep-3B细胞的生长具有较强的抑制作用,而对人脐静脉内皮细胞HUVEC的生长无明显抑制效果.[结论]来源于大肠杆菌Nissle1917的L-天冬酰胺酶Ⅱ能显著抑制4T1细胞和Hep-3肿瘤细胞的生长,而对人正常组织细胞的生长无明显抑制效果,为进一步研究L-天冬酰胺酶Ⅱ特异性抗肿瘤作用机制和对实体瘤的应用研究奠定了重要基础.

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来源
《微生物学通报》 |2014年第4期|607-613|共7页
作者
梁毅偈; 孙运军; 胡胜标; 颜富; 张旭; 白利明; 张友明; 丁学知; 夏立秋;
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作者单位

湖南师范大学生命科学学院微生物分子生物学国家重点实验室培育基地湖南长沙 410081;

湖南师范大学生命科学学院微生物分子生物学国家重点实验室培育基地湖南长沙 410081;

湖南师范大学生命科学学院微生物分子生物学国家重点实验室培育基地湖南长沙 410081;

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湖南师范大学生命科学学院微生物分子生物学国家重点实验室培育基地湖南长沙 410081;

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正文语种 chi
中图分类
关键词
L-天冬酰胺酶Ⅱ; 大肠杆菌; 克隆; 抗肿瘤;

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