重组根瘤农杆菌葡萄糖耐受型β-葡萄糖苷酶性质

郭华; 边英男; 刘锐; 郑茂发; 黄伟达

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重组根瘤农杆菌葡萄糖耐受型β-葡萄糖苷酶性质

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目前已发现的葡萄糖耐受型β-葡萄糖苷酶均来源于真菌,尚无原核细胞来源的相关报道.从根瘤农杆菌LBA4404中克隆β-葡萄糖苷酶基因bg1,将其构建在表达载体pET-28b上,转化Escherichia coli RP(DE3),IPTG诱导表达.重组β-葡萄糖苷酶的比活高达36.7 μmol/(min·mg).对经过Ni柱纯化的重组酶进行酶学分析发现:该酶是糖基水解酶家族1的成员,底物亲和力高,专一性低,在温度为40℃和pH在5-8之间时具有较高的酶活,在低于40℃C和pH 5-10之间时可稳定保存.以pNP-β-Glc为底物,该酶的最适pH为6.4,最适温度为60℃,在37℃和pH 6.4的反应体系中,该酶的Km为0.09 mmol/L,竞争性抑制剂葡萄糖酸-δ-内酯和葡萄糖的Ki分别为0.03 mmol/L和75 mmol/L,具有很高的葡萄糖耐受性,当金属离子Ag+和zn2+存在时,酶活被明显抑制.该酶对pNP-β-Gal和pNP-α-Glc的Km分别为3.61 mmol/L和14.31 mmol/L.

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来源
《微生物学通报》 |2010年第9期|1356-1361|共6页
作者
郭华; 边英男; 刘锐; 郑茂发; 黄伟达;
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作者单位

复旦大学生物化学与分子生物学系,上海,200433;

复旦大学生物化学与分子生物学系,上海,200433;

复旦大学生物化学与分子生物学系,上海,200433;

复旦大学生物化学与分子生物学系,上海,200433;

复旦大学生物化学与分子生物学系,上海,200433;

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正文语种 chi
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关键词
β-葡萄糖苷酶; 根瘤农杆菌LBA4404; 葡萄糖耐受性;

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