新型苏云金芽孢杆菌(-)γ-内酰胺酶基因的克隆与表达

孙康; 鲁明杰; 于爽; 迟乃玉

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新型苏云金芽孢杆菌(-)γ-内酰胺酶基因的克隆与表达

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[背景]γ-内酰胺是一种重要的医药中间体,其自身具备手性不利于药物合成,通过γ-内酰胺酶选择性拆分可实现光学纯γ-内酰胺的制备.[目的]挖掘来源苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)的γ-内酰胺酶基因,探索光学纯γ-内酰胺的制备工艺.[方法]通过“acetamidase/formamidase”关键词检索苏云金芽孢杆菌基因组,对检索出的两条序列进行异源表达,而后通过高效液相色谱法检测重组菌对γ-内酰胺的降解情况,确定克隆的基因是否为γ-内酰胺酶基因.利用构建的重组菌进行5L发酵、底物拆分、产物回收的生产应用尝试.[结果]构建的skA2重组菌株具有(-)γ-内酰胺酶活性,其在小规模制备生产中表现良好.[结论]A基因是一段未经报道的(-)γ-内酰胺酶基因,丰富了生产者的酶工具箱.构建的skA2菌株可以满足工业制备(+)γ-内酰胺的生产需求,为合成光学纯药物奠定坚实基础.

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来源
《微生物学通报》 |2020年第7期|2040-2049|共10页
作者
孙康; 鲁明杰; 于爽; 迟乃玉;
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作者单位

大连大学生命科学与技术学院辽宁大连 116622;

大连大学生命科学与技术学院辽宁大连 116622;

大连大学生命科学与技术学院辽宁大连 116622;

大连大学生命科学与技术学院辽宁大连 116622;

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正文语种 chi
中图分类
关键词
γ-内酰胺酶; γ-内酰胺; 基因发掘; 手性拆分;

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