制备脆弱拟杆菌来源的新型α-半乳糖苷酶单抗用于检测通用型红细胞中的微量残留酶

李素波; 贠志敏; 高红伟; 张雪; 檀英霞; 张士坤; 季守平; 宫锋

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目的建立一种检测微量脆弱拟杆菌（Bacteroides fragilis）来源的α-半乳糖苷酶的方法用于测定酶解转变的通用型红细胞上的残留酶。方法用脆弱拟杆菌来源的基因重组α-半乳糖苷酶（纯度大于90%）免疫BALB/c小鼠,制备单抗;用稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株制备腹水单抗,再经HiTraprProtein A柱纯化获得高纯度的抗体;间接ELISA法测定单抗效价,Western印迹法评价单抗特异性。联合纯化后的单抗和兔多抗采用间接ELISA法检测酶解法制备的通用型红细胞和洗涤液中的残留酶量。结果获得了高效价高纯度的单抗,Western印迹实验显示该抗体可特异性地与新型α-半乳糖苷酶结合;间接ELISA法检测微量α-半乳糖苷酶的下限为1ng/ml,红细胞按1∶4的体积比经4次洗涤后,其残留酶量〈10ng/ml。结论所建立的在血型转变过程中检测微量残留α-半乳糖苷酶的方法,可用于酶解法制备的通用型红细胞的安全性评价。

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来源
《军事医学》 |2015年第4期|P.302-305|共4页
作者
李素波; 贠志敏; 高红伟; 张雪; 檀英霞; 张士坤; 季守平; 宫锋;
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作者单位

军事医学科学院野战输血研究所,北京100850;

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正文语种 CHI
中图分类 R457.11;
关键词
α-半乳糖苷酶; 单克隆抗体; 血型转变; 通用型红细胞; 残留酶检测;

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