骆驼蓬种子中一种具抗肿瘤活性蛋白的分离纯化及鉴定

马晓瑾; 吴婷; 罗晶晶; 王燕; 李阳; 刘东亮; 孙素荣

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骆驼蓬种子中一种具抗肿瘤活性蛋白的分离纯化及鉴定

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A novel protein with anti-proliferative activity, namaly PhLTP, was isolated from Peganum harmala seeds by a combined procedure involving extraction,ammonium sulfate precipitation,ion exchange chromatography on CM-Sepharose and gel-filtration on Superdex 75. The apparent molecular mass of the purified Peganum harmala protein was 14. 8 kDa, with comprising of homodimer. It has similar N-terminal amino acid sequences with non-specific lipid transfer proteins ( nsLTPs) of the other plants using NCB1 Blast searching for short. PhLTP showed anti-proliferative activity towards some well established cancer cell lines,e. g. Eca-109,MGC-9,BEL-740,and HeLa. The inhibitory effect on the HeLa cell viability was dependent on both concentration and time,and the hemi-inhibitory concentration was 45μg/mL after 48 hour. PhLTP was also found that this protein induced apoptosis in HeLa cells as evidenced by cell morphological analysis.%骆驼蓬种子经浸提、硫酸铵沉淀、CM阳离子交换层析和Superdex 75凝胶过滤层析分离纯化得到一种具有抗肿瘤细胞增殖活性的蛋白(命名为PhLTP),经Tricine-SDS-PAGE检测为单一蛋白条带,高效液相色谱检测其表观分子量为14.8 kDa左右,表明PhLTP是由两条相同的亚基组成的蛋白.采用Edman降解法对该纯化蛋白的N-末端进行氨基酸测序,其N-末端序列与其他植物非特异性脂转移蛋白相似.对PhLTP抗肿瘤活性进行研究,结果表明其对HeLa、Eca-109、MGC-9和BEL-7404细胞都有增殖抑制活性,其中对HeLa细胞增殖的抑制作用较好,并具有浓度和时间依赖性,其IC50为45 μg/mL.通过Hoechst33258染色观察细胞形态,发现PhLTP能诱导HeLa细胞发生凋亡.

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来源
《天然产物研究与开发》 |2012年第8期|1020-1025|共6页
作者
马晓瑾; 吴婷; 罗晶晶; 王燕; 李阳; 刘东亮; 孙素荣;
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作者单位

新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室,乌鲁木齐830046;

新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室,乌鲁木齐830046;

新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室,乌鲁木齐830046;

新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室,乌鲁木齐830046;

新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室,乌鲁木齐830046;

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新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室,乌鲁木齐830046;

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正文语种 chi
中图分类有效成分的分离与提取;
关键词
骆驼蓬; 脂转移蛋白; 分离纯化; 抗肿瘤; 诱导凋亡;

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