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^(99m)Tc-HYNIC-PTP的制备及其胰腺癌裸小鼠移植瘤模型SPECT显像研究

         
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目的:制备^(99m)Tc-肼基烟酰胺(hydrazino-nicotinamide,HYNIC)-网蛋白靶向肽(plectin targeted peptide,PTP),探讨其用于胰腺癌单光子发射计算机断层成像(single photon emission computed tomography,SPECT)的可行性。方法:PTP多肽N端赖氨酸残基游离的氨基分别与HYNIC和异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)反应,制备HYNIC-PTP和FITC-PTP。在三(羟甲基)甲基甘氨酸和乙二胺二乙酸的磷酸盐缓冲生理盐水(phosphatebuffered saline,PBS;p H=6.0)体系中,以Sn Cl2为还原剂,100°C反应10 min标记^(99m)Tc,得到^(99m)Tc-HYNIC-PTP标志物。利用快速薄层色谱(instant thin layer chromatography,ITLC)分析放射化学纯度,以及在室温PBS和37°C胎牛血清中的稳定性。细胞增殖-毒性试验[细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)]评价检测HYNIC-PTP多肽体外对Bx PC-3细胞增殖的影响;蛋白质印迹法(Western blot)比较胰腺癌细胞Bx PC-3、PANC-1与小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞(β-TC-6细胞)内网蛋白(plectin)的表达量;流式细胞术分析FITC-PTP与Bx PC-3细胞的体外结合靶向性。建立皮下胰腺癌裸小鼠移植瘤模型,经尾静脉注射^(99m)Tc-HYNIC-PTP后,在不同时间点(0.5、1.0、2.0、4.0和6.0 h)进行SPECT,分析肿瘤摄取情况。结果:ITLC分析表明,^(99m)Tc-HYNIC-PTP放射化学纯度大于99%,且体外稳定性良好;Western blot证实,plectin在Bx PC-3与PANC-1细胞中都高度表达,远高于阴性对照β-TC-6细胞(P<0.001);流式细胞术结果显示,FITC-PTP在阳性对照PANC-1细胞和Bx PC-3细胞中的荧光信号强度无明显差异,表明FITC-PTP对Bx PC-3细胞具有良好的靶向性。SPECT显像表明,^(99m)Tc-HYNIC-PTP在Bx PC-3胰腺癌裸小鼠移植瘤模型中具有良好的肿瘤摄取,注射0.5 h后肿瘤部位即有显影,1.0 h后明显增强,2.0 h显影清晰,4.0 h有所下降,6.0 h后肿瘤部位仍有清楚显影。结论:本研究成功制备了^(99m)Tc-HYNIC-PTP,方法简便、放射化学纯度高、稳定性好,在胰腺癌裸小鼠移植瘤模型中具有明显的肿瘤浓聚,有潜力成为一种胰腺癌分子影像探针。

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