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高效液相色谱串联质谱法检测末梢全血中25-羟维生素D含量的方法及其临床应用

         
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目的建立快速、灵敏的微量末梢全血样本中25-羟维生素D_(2)和25-羟维生素D_(3)的高效液相色谱串联质谱检测方法,并分析苏州地区0~14岁儿童的25-羟维生素D营养状况。方法采用甲醇蛋白沉淀和正己烷液液萃取进行样本前处理,上清液氮气吹干,80%乙腈复溶后,使用高效液相色谱串联质谱(ESI+)多反应监测模式、同位素内标法检测25-羟维生素D_(2)和25-羟维生素D_(3)的含量,对方法进行验证,并分析苏州地区2858例0~14岁体检儿童的25-羟维生素D营养状况。结果25-羟维生素D_(2)和25-羟维生素D_(3)在2.50~125.00 ng·ml^(-1)浓度范围内线性良好,线性相关系数分别为0.9997、0.9998。25-羟维生素D_(2)低浓度质控样本和高浓度质控样本的批内和批间精密度均<6.5%,准确度为97.3%~105.5%;25-羟维生素D_(3)低浓度质控样本和高浓度质控样本的批内和批间精密度均<8.6%,准确度为88.7%~102.2%。经考察无明显基质效应,样本可在常温(25℃)稳定保存3 d,可在4℃稳定保存7 d。2858例儿童25-羟维生素D检测结果显示秋季水平较高,为35.96(27.81~44.04)ng·ml^(-1),4个季节间的数据差异有统计学显著差异(P<0.01);随着年龄的增长,25-羟维生素D水平呈下降趋势,0~12个月儿童的水平最高,为36.90(26.56~45.80)ng·ml^(-1),8~14岁组水平最低,为16.91(13.41~23.46)ng·ml^(-1),4个年龄组间的数据差异有统计学显著差异(P<0.01)。结论本研究建立了高效液相色谱串联质谱法测定微量末梢全血中25-羟维生素D_(2)和25-羟维生素D_(3)的方法,简单快捷、灵敏度高、准确度好,可应用于临床。

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