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隐地蛋白(cryptogein)基因定点突变及其广谱抗病烟草转化植株的获得

         

摘要

用PCR法从隐地疫霉(Phytophthora cryptogea)基因组DNA中克隆了cryptogein(Cry)基因.将Cry基因的13位赖氨酸(K)突变成缬氨酸(V),获突变基因CryK13V,并将其构建于CaMV35S启动子控制的植物表达载体上.通过农杆菌介导的叶盘转化法转入烟草,经卡那霉素抗性筛选获33株再生植株,PCR检测和Southern杂交分析表明CryK13V基因已整合到烟草基因组中.接种试验结果表明,转基因烟草植株对黑胫病菌、赤星病菌和野火病菌等的抗性均有提高.Northern杂交分析表明,微弱的CryK13V基因在转化植株中的表达就足以激活PR1和OPBP1等防卫反应相关基因的表达,而且表达丰度与转基因植株的抗病性有着一定的正相关性.研究结果还表明,隐地蛋白13位上的赖氨酸在诱导细胞死亡中起着关键的作用.

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