琼脂固体培养基培养蜜环菌菌索总DNA的提取

邓艳芹; 李作洲; 王传华; 黄宏文

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野外采集的蜜环菌[Armillaria mellea(Vahl.ex Fr.)Quel]在提取DNA前需要分离获得纯化的菌丝体。常规液体培养获得菌丝团的方法感杂率较高,采集固体培养基表面cellophane膜上形成的菌丝则难以获得足量的DNA提取材料。蜜环菌细胞内含有大量多醣类物质,也使得蜜环菌高质量DNA的提取存在一定的困难。本研究通过改进试验,提供一个直接从琼脂固体培养基培养的蜜环菌菌索中提取高质量DNA的方法。其中样品的预先冻融处理方法可以促使蜜环菌菌索与琼脂分离;而在裂解提取缓冲液裂解材料细胞后加入1.25 mol/L KAc溶液,则有利于除去蜜环菌细胞内的多醣类物质以及残留的少量琼脂。通过琼脂糖电泳、紫外分光光度计对DNA浓度及OD值的测定、ISSR引物的PCR扩增以及酶切产物的PCR扩增等方法的检测,结果均表明该方法提取的DNA质量较好,符合进一步进行分子生物学研究的要求。

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来源
《植物科学学报》 |2007年第4期|371-376|共6页
作者
邓艳芹; 李作洲; 王传华; 黄宏文;
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作者单位

中国科学院武汉植物园;

三峡大学化学与生命科学学院;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类脱氧核糖核酸（DNA）;
关键词
蜜环菌; 菌索; DNA提取; 琼脂固体培养基; 多醣;

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