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miR-335通过调控铁死亡对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用及机制研究

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目的探究miR-335通过调控铁死亡对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用及机制。方法本实验时间为2022年3—9月。将180只成年雄性Sprague Dawley大鼠随机分为假手术组、模型组、miR-335模拟物组、miR-335模拟物对照组、miR-335抑制物组、miR-335抑制物对照组,每组30只。假手术组大鼠仅暴露右侧大脑中动脉并缝合。模型组大鼠制备大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)损伤模型。miR-335模拟物组大鼠在大脑中动脉脑立体定位注射miR-335模拟物腺相关病毒2μl,7 d后制备MCAO/R损伤模型。miR-335模拟物对照组大鼠在大脑中动脉脑立体定位注射miR-335模拟物空载体,7 d后制备MCAO/R损伤模型。miR-335抑制物组大鼠在大脑中动脉脑立体定位注射miR-335抑制物腺相关病毒2μl,7 d后制备MCAO/R损伤模型。miR-335抑制物对照组大鼠在大脑中动脉脑立体定位注射miR-335抑制物空载体,7 d后制备MCAO/R损伤模型。模型制备后12、24、72 h,分别在各组随机选取10只大鼠并将其处死,取缺血半暗带区脑组织以进行后续实验。采用Zea Longa评分评估各组大鼠神经功能缺损程度,采用qRT-PCR检测各组大鼠脑组织miR-335、F-box和富含亮氨酸的重复蛋白5(FBXL5)mRNA、核受体共激活因子4(NCOA4)mRNA相对表达量,采用Western blot法检测各组大鼠脑组织FBXL5、NCOA4蛋白相对表达量。结果本研究大鼠均建模成功。假手术组大鼠Zea Longa评分为0分。模型制备后12、24、72 h,miR-335模拟物组大鼠Zea Longa评分低于miR-335模拟物对照组,miR-335抑制物组大鼠Zea Longa评分高于miR-335抑制物对照组(P<0.05)。模型制备后12、24、72 h,模型组大鼠脑组织miR-335相对表达量低于假手术组,miR-335模拟物组大鼠脑组织miR-335相对表达量高于miR-335模拟物对照组,miR-335抑制物组大鼠脑组织miR-335相对表达量低于miR-335抑制物对照组(P<0.05)。模型制备后12、24、72 h,模型组大鼠脑组织FBXL5 mRNA、蛋白相对表达量低于假手术组,miR-335模拟物组大鼠脑组织FBXL5 mRNA、蛋白相对表达量高于miR-335模拟物对照组,miR-335抑制物组大鼠脑组织FBXL5 mRNA、蛋白相对表达量低于miR-335抑制物对照组(P<0.05);模型制备后12、24、72 h,模型组大鼠脑组织NCOA4 mRNA、蛋白相对表达量高于假手术组,miR-335模拟物组大鼠脑组织NCOA4 mRNA、蛋白相对表达量低于miR-335模拟物对照组,miR-335抑制物组大鼠脑组织NCOA4 mRNA、蛋白相对表达量高于miR-335抑制物对照组(P<0.05)。结论上调miR-335表达可有效减轻MCAO/R损伤模型大鼠神经功能缺损程度,其机制可能与miR-335促进FBXL5表达、抑制NCOA4表达,调控铁自噬与铁代谢,进而影响铁死亡有关。

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