提高定量PCR技术结果准确性的理论性研究

克丙申; 陈英剑; 陈世敏; 徐军; 齐法莲

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提高定量PCR技术结果准确性的理论性研究

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目的目前的定量PCR技术的误差较大,本研究旨在探讨提高定量PCR技术准确性的方法.方法 PCR动力学数学模型的研究提示,提高测定荧光信号的精度,结合CT值参数,可以进一步提高定量PCR技术定量结果的准确性.以前的方法在技术上存在的问题忽略了具有相同CT值时不同模板数荧光强度的变化规律.使用动力学模型可以方便的研究不同模板数在达到CT值时的荧光强度及它的变化规律.结果研究提示使用精确到4位数的荧光强度数据,在100模板以下可以精确到一个模板,模板数自100～1000000区间定量结果的准确性可达95%以上.根据模拟实验数据进行的定量PCR资料分析提示,定量PCR仪器提高测定荧光信号精度达到1%,CT值结合荧光强度可以使定量测定误差降低到10%的范围,大幅度提高定量结果的准确性.目前仪器10%左右或更大的荧光信号测定误差以及数据的处理方法只能是现在的定量误差水平,80%的模板测定误差.结论提高定量PCR定量结果准确性的首要技术是改进仪器,提高仪器对微弱荧光信号测定精度,同时改进数据的处理方法.

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来源
《实用医药杂志》 |2005年第5期|422-426|共5页
作者
克丙申; 陈英剑; 陈世敏; 徐军; 齐法莲;
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作者单位

济南军区总医院免疫科,山东,济南,250031;

济南军区总医院免疫科,山东,济南,250031;

济南军区总医院免疫科,山东,济南,250031;

济南军区总医院免疫科,山东,济南,250031;

济南军区总医院免疫科,山东,济南,250031;

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正文语种 chi
中图分类免疫学检验方法;
关键词
定量PCR PCR动力学动力学数学模型荧光定量PCR;

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