脊髓灰质炎2型病毒样颗粒在毕赤酵母内的表达与鉴定

赵辉; 温晔; 彭少丹; 晏巧玲; 马金; 朱涛

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脊髓灰质炎2型病毒样颗粒在毕赤酵母内的表达与鉴定

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目的构建可稳定表达脊髓灰质炎病毒(poliovirus,PV)类病毒颗粒(virus-like particles,VLPs)的整合型重组毕赤酵母,鉴定PV VLPs在毕赤酵母细胞中的表达及组装情况。方法根据毕赤酵母密码子偏好性优化salk株II型P1和3CD基因并连接到p Pic ZA载体,构建p Pic ZA-P1-3CD表达载体;用Bgl II线性化p Pic ZA-P1-3CD载体,电转至毕赤酵母GS115中。通过Zeocin抗性筛选获得整合型重组毕赤酵母,随后用高浓度Zeocin抗性筛选得到高表达菌株。甲醇诱导后,用Western Blot检测目的蛋白表达;蔗糖密度梯度离心纯化PV VLPs并进行透射电镜观察。结果成功构建p Pic ZA-P1-3CD表达载体,获得PV VLPs重组毕赤酵母。Western Blot在重组毕赤酵母裂解上清中检测到目的蛋白的表达;蔗糖密度梯度离心纯化后,在透射电镜中观察到直径为30 nm左右的VLPs,其形态与天然的PV颗粒相似。结论成功构建PV-2型VLPs的整合型重组酵母系统,并在毕赤酵母中组装形成了VLPs,为酵母表达系统中PV VLPs疫苗的研制奠定了基础。

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来源
《微生物学免疫学进展》 |2018年第4期|7-13|共7页
作者
赵辉; 温晔; 彭少丹; 晏巧玲; 马金; 朱涛;
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作者单位

天津科技大学生物工程学院;

康希诺生物股份公司新技术开发部;

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正文语种 chi
中图分类脊髓灰质炎（小儿麻痹症）;
关键词
脊髓灰质炎病毒; 毕赤酵母; 蔗糖密度梯度离心; 病毒样颗粒;

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