氯离子通道-3反义寡核苷酸对内皮素-1促增殖体外培养的牛角膜内皮细胞的抑制作用

胡维琨; 谢二娟; 张虹; 李贵刚; 刘荣

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目的观察氯离子通道-3(chloride channel 3,CIC-3)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,AS-ODN)对内皮素1(endothelin-1,ET-1)促增殖体外培养的牛角膜内皮细胞(bovine corneal endothelial cells,BCECs)的抑制作用.方法 BCECs细胞悬液接种培养12 h后,通过脂质体介导转染不同浓度的ClC-3寡核苷酸.体外培养BCECs 24 h后加入200 pmol·L-1 ET-1,继续培养48 h.通过倒置荧光显微镜观察BCECs寡核苷酸的摄取.采用逆转录聚合酶链反应、免疫印迹法检测ClC-3 mRNA和蛋白的表达.采用MTT法观察BCECs增殖状况,计算细胞存活率,同时应用流式细胞仪检测细胞周期时相的变化,计算细胞增殖指数.结果寡核苷酸可被培养的BCECs摄取.ClC-3 mRNA与蛋白的表达变化呈平行关系.与不加时相比,ClC-3 AS-ODN浓度依赖性地减少BCECs ClC-3 mRNA和蛋白的表达,同样也浓度依赖性地降低BCECs MTT吸光度值(OD值)和细胞存活率.经100 mg·L-1ClC-3 ASODN处理后,与对照组相比,细胞G0/G1期细胞比例明显增高,S期及G2期细胞比例则明显降低,出现明显的凋亡峰,增殖指数明显下降.结论 ClC-3 AS-ODN可能通过减少ClC-3 mRNA和蛋白的表达,浓度依赖性抑制ET-1对体外培养BCECs的增殖作用,并使细胞周期停滞在G1期.

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来源
《眼科新进展》 |2010年第10期|914-917923|共5页
作者
胡维琨; 谢二娟; 张虹; 李贵刚; 刘荣;
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作者单位

430030,湖北省武汉市,华中科技大学同济医学院附属同济医院眼科;

430064,湖北省武汉市,湖北省医学会;

430030,湖北省武汉市,华中科技大学同济医学院附属同济医院眼科;

430030,湖北省武汉市,华中科技大学同济医学院附属同济医院眼科;

430030,湖北省武汉市,华中科技大学同济医学院附属同济医院眼科;

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正文语种 chi
中图分类角膜疾病;
关键词
氯离子通道-3; 反义寡核苷酸; 内皮素-1; 增殖; 角膜内皮细胞; 牛;

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