猪卵透明带-3β截短型蛋白在原核系统中的表达研究

孙奋勇; 陈小佳; 朱伟杰; 谢秋玲; 吴健虹; 徐万祥; 洪岸; 李菁

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目的:制备具有猪卵透明带-3β抗原活性的截短型pZP3β蛋白(tunc-pZP3β),以便对该蛋白的抗原表位区域作深入研究.方法:采用PCR方法扩增原cDNA中编码第130个氨基酸到第290个氨基酸的DNA序列.获得的tunc-pZP3β基因片段通过引入其两端的Nde I和BamH I酶切位点被定向插入pET-3c质粒T7强启动子下游的多克隆区,筛选出重组子,经DNA测序验证正确后,转化表达菌株BL21(DE3)pLysS,再用IPTG对重组菌体进行诱导.结果:SDS-PAGE分析表明tuncpZP3β在大肠杆菌系统中高水平表达,且在Western Blot免疫印迹中能被特异性抗体识别.结论:对适当的抗原表位序列进行保留而截去两端一定的氨基酸序列,所获得的截短型蛋白能够实现在大肠杆菌中高效表达,这有利于深入研究该蛋白核心区域的功能.

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来源
《生殖与避孕》 |2005年第6期|323-327|共5页
作者
孙奋勇; 陈小佳; 朱伟杰; 谢秋玲; 吴健虹; 徐万祥; 洪岸; 李菁;
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作者单位

暨南大学生物工程研究所,广州,510632;

暨南大学生物工程研究所,广州,510632;

暨南大学生殖免疫研究中心,广州,510632;

暨南大学生物工程研究所,广州,510632;

暨南大学生物工程研究所,广州,510632;

上海市计划生育科研所,上海,200032;

暨南大学生物工程研究所,广州,510632;

暨南大学医学院病理生理教研室,广州,510632;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类生物工程应用;
关键词
截短型; 猪卵透明带-3 β:大肠杆菌; 表达;

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