人胰岛素原DNA疫苗的构建与鉴定

蒋铁建; 周智广; 苏恒; 罗建华

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人胰岛素原DNA疫苗的构建与鉴定

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构建1型糖尿病关键自身抗原胰岛素原(Proinsulin)的DNA疫苗,并在体外对其表达产物进行鉴定.从人胰腺cDNA文库用半巢式PCR扩增出编码Proinsulin的cDNA,克隆入载体PGEM-T中,再将其亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组载体pcDNA3.1(+)/Proinsulin,测序后在真核细胞COS-7中进行体外短暂表达,Western印迹法对其表达产物进行鉴定.结果克隆的人Proinsulin基因,测序表明其cDNA序列与Genbank公布的序列基本相同,仅在第63位氨基酸(C肽区)有一CAG(Glu)→CGG(Arg)的突变,Western免疫印迹法证实DNA疫苗在COS-7细胞中有效地获得了表达.结果说明运用基因克隆方法构建的Proinsulin DNA疫苗,在真核细胞内能有效地表达Proinsulin重组抗原.该疫苗的构建成功,为1型糖尿病的免疫干预提供了实验基础.

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来源
《科学技术与工程》 |2003年第2期|139-142|共4页
作者
蒋铁建; 周智广; 苏恒; 罗建华;
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作者单位

中南大学湘雅二医院代谢内分泌研究所,长沙,410011;

中南大学湘雅二医院代谢内分泌研究所,长沙,410011;

中南大学湘雅二医院代谢内分泌研究所,长沙,410011;

中南大学湘雅二医院代谢内分泌研究所,长沙,410011;

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正文语种 chi
中图分类胰岛素及胰高血糖素;
关键词
DNA疫苗分子克隆胰岛素原 1型糖尿病;

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