猪脑心肌炎病毒VR-129 B株VP2重组蛋白的构建表达及其免疫活性分析

吴云; 赵月; 吴庆荣; 陈柯君; 张俊辉; 万华印; 李茹冰; 李健

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cqvip:为获得大量猪脑心肌炎VP2基因及蛋白研究的细胞模型,构建pDC315-EMCV-VP2真核表达载体,且将其转染到293T细胞,筛选出阳性质粒进行克隆。EMCV VR-129B株VP2基因序列参照GenBank(登录号:X74312),利用RT—PCR方法扩增VP2的全基因序列,将其与质粒pDC315经NheI和XhoI双酶切后连接,构建pDC315-EMCV-VP2重组表达质粒,并将其转染至293T细胞。使用荧光定量PCR方法观察pDC315-EMCV-VP2真核表达载体在细胞中的表达情况。双酶切PCR结果获得大小为780 bp的基因片段,测序结果显示与GenBank上已经公布的同名基因(登录号:X74312)序列片段同源性为100%,重组质粒构建成功。实时荧光定量PCR(QPCR)结果显示,重组质粒转染组与空质粒组之间相比,EMCV-VP2基因的表达量显著上调(P<0.001);在荧光显微镜下观察转染细胞,转染成功部分出现较亮绿色荧光,EMCV-VP2基因表达稳定。从转染细胞中提取重组蛋白与EMCV阳性血清和阴性血清进行ELisa反应,具有较好免疫活性。

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来源
《科学技术与工程》 |2019年第34期|116-122|共7页
作者
吴云; 赵月; 吴庆荣; 陈柯君; 张俊辉; 万华印; 李茹冰; 李健;
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作者单位

广东药科大学药学院广州510006;

中国科学院大学深圳医院深圳518106;

中国人民解放军南部战区总医院药剂科;

广州市众为生物技术有限公司广州510006;

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正文语种 chi
中图分类家畜病毒学;
关键词
脑心肌炎病毒; 重组质粒pDC315-EMCV-VP2; 转染; Q-PCR; 免疫活性;

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