重组大肠杆菌BL21（DE3）/pET-S12表达头孢菌素酰化酶的诱导条件优化

任羽; 张建安; 朱玉山

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重组大肠杆菌BL21（DE3）/pET-S12表达头孢菌素酰化酶的诱导条件优化

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头孢菌素酰化酶AcyⅡ可以直接水解CPC生成7-ACA,后者是重要的医药中间体,用来合成头孢类抗生素。头孢菌素酰化酶S12是AcyⅡ的突变体,其催化效率比AcyⅡ高。本文通过优化头孢菌素酰化酶S12在大肠杆菌BL21（DE3）中的诱导表达条件,为确定周期短、产率高且稳定可靠的发酵工艺奠定基础。利用单因素和正交设计对装液量、接种量、诱导时间,诱导温度和IPTG浓度等发酵条件进行了考察。单因素结果表明：装液量为25mL/250mL三角瓶,接种量1%,指数生长开始加入0.05mM IPTG,28℃诱导20小时发酵液酶活最高;正交试验结果表明：装液量50mL/250mL三角瓶,接种量2%,指数生长开始加入0.05mM IPTG,诱导28℃且诱导24hours酶活最高,发酵液产酶水平达639.9U/L。方差分析结果显示,发酵时间和装液量对酶活影响极显著,诱导时机对酶活影响显著,接种量对酶活没有显著影响。验证实验发现,发酵液产酶水平最高可以达到802.9U/L。本实验为该工程菌的发酵研究提供了最佳的表达诱导条件,对下一步的研究具有指导意义。

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来源
《科技创新导报》 |2012年第11期|249-250|共2页
作者
任羽; 张建安; 朱玉山;
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作者单位

清华大学化学工程系,北京100084;

清华大学核能与新能源设计研究院,北京100084;

清华大学化学工程系,北京100084;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类化学工业;
关键词
头孢菌素酰化酶; 发酵; 诱导条件优化; 正交试验设计;

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