Methocult M3534培养基培养小鼠c-kit+心脏干细胞向心肌细胞和窦房结细胞分化的结果观察

姜爱侠; 冀天基; 文德重; 石林; 李奋

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目的观察Methocult M3534(简写为M3534)培养基培养小鼠c-kit+心脏干细胞(CSCs)向心肌细胞与窦房结细胞分化的结果.方法首先测定成年小鼠c-kit+CSCs的自我增殖能力和多向分化潜能,然后置于CSCs常规培养基(对照组)或含1％M3534的培养基(M3534组)中培养.培养2周或3周后分别通过RT-PCR、细胞免疫荧光染色检测心肌细胞特异标记物(Gata4、cTnI、Serca2a和 α-SA)和窦房结细胞特异标记物(Hcn2、Hcn4、Gata6、Tbx3、Tbx5和Cx45)的基因和蛋白;应用Western blotting法检测两组中Serca2α、Hcn4、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-Erk)和总细胞外调节蛋白激酶(t-Erk)蛋白(检测Erk信号通路在细胞分化中的作用),并比较.结果分离纯化的c-kit+CSCs具有自我增殖和多向分化能力.培养3周时,与对照组比较,M3534组c-kit+CSCs心肌细胞特异标记物Gata4、cTnI、Serca2a和 α-SA基因表达升高,Serca2α、α-SA阳性细胞率升高(P均<0.05);M3534组上述心肌细胞特异标记物培养3周高于培养2周时(P均<0.05).培养3周时,与对照组比较,M3534组c-kit+CSCs窦房结细胞特异标记物Hcn2、Hcn4、Gata6、Tbx3、Tbx5和Cx45基因表达升高,Hcn4阳性细胞率升高(P均<0.05);M3534组上述窦房结细胞特异标记物培养3周高于培养2周时((P均<0.05).培养3周时,与对照组比较,M3534组Serca2α、HCN4蛋白表达及p-Erk1/2/t-Erk1/2升高(P均<0.05);M3534组培养2周时Serca2α、HCN4蛋白表达及p-Erk1/2/t-Erk1/2高于培养3周时(P均<0.05).结论与CSCs常规培养基比较,M3534培养基培养的c-kit+CSCs向心肌细胞和窦房结细胞分化的效能更高,分化过程中可能有Erk通路参与.

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来源
《山东医药》 |2019年第9期|32-36|共5页
作者
姜爱侠; 冀天基; 文德重; 石林; 李奋;
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作者单位

上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心;

上海 200127;

上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心;

上海 200127;

上海交通大学医学院附属仁济医院;

上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心;

上海 200127;

上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心;

上海 200127;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类小儿心脏、血管疾病;
关键词
Methocult M3534培养基; 心脏干细胞; 心肌细胞; 窦房结细胞; 细胞外调节蛋白激酶;

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