心脏干细胞

摘要： 目的 探讨鹿红方(LHF)对氧糖剥夺模型心脏干细胞(CSCs)自噬和抗凋亡能力的影响.方法 将CSCs随机分为对照组(正常培养)与氧糖剥夺造模组(缺血缺氧).将造模组分为模型组(不予有效干预措施)、自噬阻断到(3-MA)组(给予自噬阻断剂)、鹿红方200μg/mL组(给予LHF 200μg/mL)和LHF200+3-MA组(给予LHF 200μg/mL+自噬阻断剂).各组给予相应干预措施后光镜下观察细胞形态,并采用CCK-8法测定细胞凋亡情况;Western Blot检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达;RT-PCR检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-ⅡmRNA的表达.结果 光镜下观察可见:LHF200组较模型组和3-MA组凋亡细胞显著减少,LHF200+3-MA组与LHF200组比较,细胞凋亡增加;CCK-8结果显示:LHF200组与模型组比较,CSCs活细胞OD值显著增高(P=0.006);LHF+3-MA组与LHF200组比较,CSCs活细胞OD值下降(P=0.03);Western Blot结果显示:LHF200组Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达较模型组显著降低(P<0.001),但显著高于3-MA组和LHF200+3-MA组(P<0.001);RT-PCR结果显示:LHF200组Beclin-1和LC3-ⅡmRNA表达较模型组显著降低(P<0.001),但显著高于3-MA组和LHF200+3-MA组(P<0.001).结论 LHF可提高氧糖剥夺模型CSCs的抗凋亡能力,其机制与调节自噬有关.

摘要： 目的 观察Methocult M3534(简写为M3534)培养基培养小鼠c-kit+心脏干细胞(CSCs)向心肌细胞与窦房结细胞分化的结果.方法 首先测定成年小鼠c-kit+CSCs的自我增殖能力和多向分化潜能,然后置于CSCs常规培养基(对照组)或含1％M3534的培养基(M3534组)中培养.培养2周或3周后分别通过RT-PCR、细胞免疫荧光染色检测心肌细胞特异标记物(Gata4、cTnI、Serca2a和 α-SA)和窦房结细胞特异标记物(Hcn2、Hcn4、Gata6、Tbx3、Tbx5和Cx45)的基因和蛋白;应用Western blotting法检测两组中Serca2α、Hcn4、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-Erk)和总细胞外调节蛋白激酶(t-Erk)蛋白(检测Erk信号通路在细胞分化中的作用),并比较.结果 分离纯化的c-kit+CSCs具有自我增殖和多向分化能力.培养3周时,与对照组比较,M3534组c-kit+CSCs心肌细胞特异标记物Gata4、cTnI、Serca2a和 α-SA基因表达升高,Serca2α、α-SA阳性细胞率升高(P均<0.05);M3534组上述心肌细胞特异标记物培养3周高于培养2周时(P均<0.05).培养3周时,与对照组比较,M3534组c-kit+CSCs窦房结细胞特异标记物Hcn2、Hcn4、Gata6、Tbx3、Tbx5和Cx45基因表达升高,Hcn4阳性细胞率升高(P均<0.05);M3534组上述窦房结细胞特异标记物培养3周高于培养2周时((P均<0.05).培养3周时,与对照组比较,M3534组Serca2α、HCN4蛋白表达及p-Erk1/2/t-Erk1/2升高(P均<0.05);M3534组培养2周时Serca2α、HCN4蛋白表达及p-Erk1/2/t-Erk1/2高于培养3周时(P均<0.05).结论 与CSCs常规培养基比较,M3534培养基培养的c-kit+CSCs向心肌细胞和窦房结细胞分化的效能更高,分化过程中可能有Erk通路参与.

摘要： AIM:To explore the effect of microRNA (miR)-21 on proliferation, migration and differentiation abilities of c-Kit+ cardiac stem cells (CSCs). METHODS:c-Kit+ CSCs were cultured and selected by the methods of en-zyme digestion and magnetic bead separation. miR-21 mimics (50 nmol/L) and mimics negative control ( MNC) were transfected into c-Kit+CSCs with Lipofectamine?2000. The cells was divided into 3 groups:control group:c-Kit+ CSCs without any pretreatment; MNC group:the cells were transfected with MNC for 48 h; mimics group:the cells were trans-fected with miR-21 mimics for 48 h. qPCR was used to assess the expression of miR-21 in each group. CCK-8 and EdU as-says were used to determine the cell proliferation. qPCR and immunofluorescence were used to detect the differentiation in each group. Scratch assay was adopted to explore the migration ability of the cells. RESULTS:The expression of c-Kit in the c-Kit+ CSCs were 90.8%, with 0.6% of CD45 and 0.5% of CD34. A significant increase in miR-21 expression was observed when the cells were transfected with miR-21 mimics for 48 h ( P<0.05). CCK-8 and EdU assays showed that miR-21 significantly increased cell proliferation as compared with MNC group and control group (P<0.05). No difference in the expression of Nkx2.5, CD31 and α-SMA at mRNA and protein levels was observed, and no difference of the migra-tion ability in 3 groups of the c-Kit+ CSCs was found. CONCLUSION:Over-expression of miR-21 significantly promotes the proliferation of c-Kit+ CSCs, without any effect on the cell migration and differentiation.%目的:探讨转染微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)对c-Kit+心脏干细胞增殖、分化和迁移的影响.方法:采用酶消化法结合免疫磁珠分选法培养c-Kit+心脏干细胞,以Lipofectamine?2000为载体将miR-21模拟物(mimics)和其阴性对照(mimics negative control,MNC)分别转染至 c-Kit+心脏干细胞.实验分为正常对照(control)组(正常培养的心脏干细胞)、MNC组(转染MNC 48h的细胞)和mimics组(转染miR-21 mimics 48 h的细胞). qPCR检测各组细胞miR-21的表达情况,以CCK-8法和EdU法检测细胞增殖状态,qPCR及免疫荧光检测细胞分化情况,划痕实验观察细胞迁移能力.结果:成功获取c-Kit+心脏干细胞,经流式细胞术鉴定其高表达 c-Kit (90.8%),低表达CD45(0.6% )及CD34(0.5%);与control组相比,mimics组中 miR-21表达量显著增高(P<0.05), MNC组中miR-21表达量与control组无明显差异. CCK-8和EdU实验结果发现与control组比较,mimics组中细胞增殖能力明显增加(P<0.05),MNC组中细胞增殖能力无明显变化;免疫荧光及qPCR结果表明3组心肌细胞谱系标志物Nkx2.5、CD31和α-平滑肌肌动蛋白水平无明显差异;细胞划痕实验结果发现,3组间细胞迁移能力无明显不同.结论:过表达miR-21可显著促进c-Kit+心脏干细胞的增殖能力,但对细胞迁移及分化能力无明显影响.

摘要： 心脏干细胞(CSCs)是修复损伤心肌的最佳途径之一,越来越多的研究发现心脏干细胞移植更多的保护作用可能得益于旁分泌机制.心脏干细胞衍生的外泌体可通过释放microRNA的方式将信息传递至靶细胞并调节其功能,进而对心脏起到保护作用,改善心功能.简要综述近年来有关心脏干细胞源的外泌体中microRNA对心脏的保护作用研究.

摘要： BACKGROUND: The prevalence of heart failure is increasing yearly. Although traditional treatment methods have made great progress in alleviating the progression of heart failure, cardiac tissue injury cannot be thoroughly cured. Cell therapy, however, has the potential to completely cure it through myocardial regeneration. OBJECTIVE: To review the current progress in adult stem cells from different sources in the treatment of heart failure. METHODS: A computer-based retrieval of PubMed and CNKI databases was performed in order to search relevant articles published from 2001 till now, using the keywords of "heart failure, adult stem cells, skeletal myoblasts, cardiac stem cells, mesenchymal stem cells. After removal of repetitive or irrelevant articles, 61 articles were finally reviewed. RESULTS AND CONCLUSION: Currently used adult stem cells for treating heart failure mainly include skeletal myoblasts, bone marrow mesenchymal stem cells, adipose-derived mesenchymal stem cells, human umbilical cord blood mesenchymal stem cells and cardiac stem cells. Most clinical results have shown that adult stem cells have a good effect in the treatment of heart failure, and cause few adverse reactions. The mechanism of adult stem cells in the treatment of heart failure may be related to post-transplantation angiogenesis, paracrine mechanisms, and cell fusion, but the choices of specific cell lines, dose, route of administration and treatment frequency as well as the precise mechanism of action still need further studies.%背景:近年来心力衰竭的发病率正在逐年增加,尽管传统治疗手段已取得了巨大的进步,但只能起到延缓心力衰竭进程的作用,并不能彻底解决心脏组织损伤的根本问题.而细胞治疗具有改变心力衰竭治疗现状的潜力,可以通过心肌再生彻底根治心力衰竭.目的:对目前几种不同成体干细胞治疗心力衰竭的研究进展做一综述.方法:以"heart failure,adult stem cells,keletal myoblasts,cardiac stem cells,mesenchymal stem cells"等为关键词检索PubMed等外文数据库,以"心力衰竭、成体干细胞、骨骼肌成肌细胞、心脏干细胞、间充质干细胞"等关键词检索CNKI等中文数据库从2001年至今的相关文献,排除与文章研究目的无关及重复性文章,纳入符合标准的61篇文献进行综述.结果与结论:目前临床研究用于治疗心力衰竭的成体干细胞种类主要包括骨骼肌成肌细胞、骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、人脐血间充质干细胞、心脏干细胞.多数临床结果显示成体干细胞在治疗心力衰竭上具有良好的效果且不良反应小,成体干细胞治疗心力衰竭的作用机制可能与移植形成新的血管、旁分泌机制、细胞融合有关,但具体细胞株、剂量、给药途径、治疗频率的选择以及精确的作用机制等仍需进一步研究.

摘要： 目的 观察补阳还五汤对缺氧预适应心脏成纤维细胞促心脏干细胞迁移的影响,探讨该药对心肌梗死的作用及可能机制.方法 复制小鼠心脏成纤维细胞缺氧预适应24 h模型,将实验分为对照组、模型组、补阳还五汤组,利用Transwell小室进行心脏干细胞迁移实验.显微镜下观察并计数迁移至小室膜下层的心脏干细胞数;RT-PCR法检测各组心脏成纤维细胞干细胞因子(SCF)、基质细胞衍生因子(SDF)-1 mRNA的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞培养液中迁移相关因子SCF、SDF-1的蛋白分泌量.结果 对照组、模型组、补阳还五汤组心脏干细胞迁移数呈递增趋势,对照组与模型组比较差异有统计学意义(P0.05),补阳还五汤组与模型组比较差异有统计学意义(均P<0.05).结论 补阳还五汤可促进缺氧预适应心脏成纤维细胞诱导的心脏干细胞迁移,其机制可能与上调心脏成纤维细胞迁移相关因子SCF、SDF-1的表达有关.

摘要： 缺血性心脏病可引起心肌细胞缺血缺氧损伤,利用干细胞促进心肌细胞再生可从根本上治疗缺血性心脏病.心脏干细胞(CSC)是一类具有分化成心肌细胞潜能的干细胞,在心肌的损伤修复中较其他干细胞有明显的优势.自CSC被发现开始,对其的研究便在不断深入.本文主要从诱导心脏干细胞迁移的信号通路、旁分泌途径以及部分中药在其迁移过程中的作用的研究现状等方面进行综述.

摘要： The transplantation of stem cells can promote the regeneration of damaged myocardium and improve cardiac function,which is ideal for the treatment of cardiovascular disease.A variety of stem cells can be utilized in the scientific research.The stem cells which are used for the treatment of cardiovascular diseases include embryonic stem cells,induced pluripotent stem cells,bone marrow mesenchymal stem cells and cardiac stem cells.Different types of stem cells have their own advantages and limitations.Embryonic stem cells are limited in their application due to ethical concerns.Induced pluripotent stem cells have the characteristics of embryonic-like cells,and have a strong ability to proliferate,but there is the risk of tumor formation.Mesenchymal stem cells can be used as universal donor cells due to their immunoregulatory properties.Cardiac stem ceils can express markers of cardiac differentiation and improve cardiac function better than other types of stem cells.In this paper,the stem ceils in cardiovascular disease research and treatment of the latest progress will be summarized.%干细胞移植能促使受损心肌再生和改善心功能,是治疗心血管疾病的理想选择.现在有多种干细胞用于研究,用于治疗心血管疾病的干细胞包括胚胎干细胞,诱导多能干细胞、骨髓间充质干细胞和心脏干细胞.不同类型的干细胞都有各自的优点和局限性.胚胎干细胞由于伦理问题应用受到限制.诱导多能干细胞具有胚胎样细胞的特性,增殖能力很强,但是有形成肿瘤的风险.间充质干细胞由于具有免疫调节特性可作为万能供体细胞.心脏干细胞比其它类型的干细胞能更好地表达心肌分化的标记物,改善心脏功能.本文对干细胞在心血管疾病研究及治疗中的最新进展进行综述.

摘要： Purpose To analyze the effects of full length and N-terminal fragment of serum response factor (SRF-Full and SRF-N) on TGF-β1-induced differentiation in c-Kit + cardiac stem cells (CSC).Methods Rat SRF-Full and SRF-N (1-254 aa) coding sequences were obtained from cDNA library and cloned into the linearized lentviral vector GV358 (Ubi-MCS3FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin) to generate the recombinant vectors,and then positive clones were selected and sequenced after transducing the competent cells with recombinant vectors.The recombinant lentvirus were packaged through transfecting the HEK293T cells with SRF-Full,SRF-N overexpressing plasmids and viral packaging plasmids.Neonatal SD rat cKit + CSCs were isolated via magnetic activated cell sorting,and TGF-β1-induced differentiation in SRF-Full and SRF-N overexpression virus-infected CSCs was assessed by quantitative PCR.Results SRF-Full and SRF-N coding sequences were successfully obtained and properly cloned into the linearized GV358.The positive clones were selected and further confirmed by sequencing.With the help of packaging plasmids,the SRFFull and SRF-N overexpressing plasmids-transfected HEK293T cells successfully produced the lentiviral particles with the titer of 2 × 108 TU/mL,and the SRF-Full-Flag and SRF-N-Flag fusion protein were detected by Western blot in virus-infected HEK293T cells.Addition of TGF-β1 significantly induced upregulated mRNAs in cardiomyocyte markers (Nkx2.5,Gata4,cTnI) and smooth muscle cell marker (SM22α) but not the epithelia cell marker (vWF) in CSCs.Overexpression of SRF-Full facilitated TGF-β1-triggered cardiomyocyte differentiation.However,SRF-N exerted anti-differentiation effects in TGF-β1-treated cells.Conclusion The SRF-Full and SRF-N overexpressing recombinant lentiviral vectors are successfully constructed.SRF-Full facilitates while SRF-N suppresses TGF-β1-induced cardiomyocyte differentiation in c-Kit + CSCs.%目的 探讨血清反应因子全长(SRF-Full)及N端片段(SRF-N,1-254aa)对TGF-β1诱导c-Kit+心脏干细胞(cardiac stemcell,CSC)分化的影响.方法 从cDNA文库扩增大鼠SRF-Full及SRF-N表达序列并克隆入酶切线性化慢病毒载体GV358(Ubi-MCS-3 FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin),转化感受态细胞筛选出阳性克隆并测序鉴定.将SRF-Full及SRF-N过表达质粒与病毒包装辅助质粒共转染工具细胞HEK293T,包装慢病毒.磁激活细胞分选法分离乳SD大鼠c-Kit+ CSC,将SRF-Full及SRF-N过表达慢病毒感染CSC并经TGF-β1诱导,定量PCR分析下游分化基因mRNA水平的变化.结果 成功扩增出SRF-Full及SRF-N编码序列并正确连接入线性化载体,获得的阳性转化子经测序无误.将转化子质粒与病毒包装辅助质粒共转染HEK293T后,获得滴度为2×108 TU/mL的慢病毒颗粒,Western blot检测到预期Flag融合蛋白.重组慢病毒感染CSC后细胞核中见eGFP信号.TGF-β1诱导CSC出现心肌细胞分化基因(Nkx2.5、Gata4、cTnI)及平滑肌细胞分化基因(SM22α)的表达,内皮细胞分化(vWF)无影响,SRF-Full促进CSC的心肌细胞分化,而SRF-N则抑制这种分化.结论 成功构建SRF-Full及SRF-N过表达重组慢病毒质粒.SRF-Full促进而SRF-N减弱TGF-β1诱导CSC的心肌细胞分化.

摘要： 目的:大鼠原代心肌细胞及心脏干细胞(CSCs)培养条件的筛选及丹参素(DS-182)对两种细胞体外增殖的影响.方法:对比组织块培养法及差速培养法,选取适宜培养基、消化液浓度、消化时间、差速贴壁时间及心脏成纤维细胞(CFs)抑制剂等因素.分别用MTT比色法、ELISA法及流式细胞术(FCM)检测丹参素对大鼠心肌细胞及CSCs体外增殖的影响.结果:确定DMEM/F121∶1培养基、100ml/L胎牛血清(FBS)、2.5g/L胰蛋白酶、5min/次×5次的消化时间及120min的差速贴壁时间为最适分离纯化条件.MTT比色法检测显示,与空白对照组相比,经浓度为7.8×10-4～1×10-1mol/L的DS-182处理12、24、48和72 h后,细胞的吸光度(A)值明显增加(P＜0.05).ELISA法检测显示,与空白对照组相比,经浓度为3.9×10-4～1×10-1 moL/L的DS-182处理24h后,细胞的A值明显增加(P＜0.05).FCM检测显示,经浓度为0.1mol/L的DS-182处理24h后,c-kit+的细胞数占细胞总数的比例增加了27.0％.结论:改良了一套较为完整的大鼠心肌细胞及CSCs的分离纯化方法.DS-182在一定浓度下(7.8×10-4～1×10-1mol/L)对大鼠心肌细胞及CSCs的增殖具有明显的促进作用.

摘要： 本发明公开了一种诱导多能干细胞分化培养心脏成纤维细胞的方法及其培养液，所述方法包括：用促心脏中胚层祖细胞培养液对诱导多能干细胞进行定向分化培养得到心脏中胚层祖细胞；再用促第二心场祖细胞培养液继续分化培养得到第二心场祖细胞；最后再用心脏成纤维细胞培养液培养得到纯化的成熟心脏成纤维细胞。本发明所述的培养方法中，取材方便，培养时间短，分化效率高，且获得的心脏成纤维细胞可用于临床治疗心力衰竭，以及体外疾病建模研究、药物筛选和其他生物医学应用。

摘要： 本发明公开了一种诱导多能干细胞分化制备心脏瓣膜内皮细胞的方法及其应用，该方法首先将多能干细胞平铺种植在基质胶包被的培养皿中用Essencial 8培养使其贴壁；将多能干细胞细胞置于含有Wnt3a和骨形态发生蛋白4的分化培养基Essencial 6中培养，再置于含有表皮生长因子和骨形态发生蛋白4分化培养基Essencial 6中培养，将心脏中胚层细胞消化，再将上述培养皿中心脏中胚层细胞置于含有骨形态发生蛋白4、转化生长因子和内皮生长因子的分化培养基Essencial 6中连续培养；得到心脏瓣膜内皮细胞；本发明的方法分化效率高，在不经过流式分选的情况下，能够得到80％以上的瓣膜内皮细胞，因而可以保证充足的种子细胞来源。

摘要： 本发明提供由多能干细胞诱导心脏祖细胞或心肌细胞的方法。本发明提供由多能干细胞制造心脏祖细胞的方法，其包括使多能干细胞表达Tbx6。进而，本发明提供由多能干细胞制造心肌细胞的方法，其包括如下工序：包括使多能干细胞表达Tbx6的、由多能干细胞诱导心脏祖细胞的工序；及、包括抑制Tbx6基因表达的、由在前述工序中诱导的心脏祖细胞诱导心肌细胞的工序。

摘要： 本发明提供一种分离的皮质骨干细胞(CBSC)来源的外来体的群体，以及包含外来体和/或其RNA的组合物，当递送至患病心脏时用于促进心脏修复。

摘要： 本发明涉及源自脂肪心脏组织的新成体干细胞群的分离和表征，所述成体干细胞组成型表达GATA-4和/或Cx43。所述细胞群可用在细胞治疗方法中以再生损伤的心肌组织。

摘要： 本发明公开了一种诱导多能干细胞分化培养心脏成纤维细胞的方法及其培养液，所述方法包括：用促心脏中胚层祖细胞培养液对诱导多能干细胞进行定向分化培养得到心脏中胚层祖细胞；再用促第二心场祖细胞培养液继续分化培养得到第二心场祖细胞；最后再用心脏成纤维细胞培养液培养得到纯化的成熟心脏成纤维细胞。本发明所述的培养方法中，取材方便，培养时间短，分化效率高，且获得的心脏成纤维细胞可用于临床治疗心力衰竭，以及体外疾病建模研究、药物筛选和其他生物医学应用。

摘要： 本发明公开了一种诱导多能干细胞分化制备心脏瓣膜内皮细胞的方法及其应用，该方法首先将多能干细胞平铺种植在基质胶包被的培养皿中用Essencial 8培养使其贴壁；将多能干细胞细胞置于含有Wnt3a和骨形态发生蛋白4的分化培养基Essencial 6中培养，再置于含有表皮生长因子和骨形态发生蛋白4分化培养基Essencial 6中培养，将心脏中胚层细胞消化，再将上述培养皿中心脏中胚层细胞置于含有骨形态发生蛋白4、转化生长因子和内皮生长因子的分化培养基Essencial 6中连续培养；得到心脏瓣膜内皮细胞；本发明的方法分化效率高，在不经过流式分选的情况下，能够得到80％以上的瓣膜内皮细胞，因而可以保证充足的种子细胞来源。

摘要： 本发明公开了一种神经鞘氨醇磷酸胆碱在制备促内源心脏干细胞分化为心脏谱系细胞药物中的应用；其中有效促进内源心脏干细胞分化为心脏谱系细胞的神经鞘氨醇磷酸胆碱(SPC)浓度为5μM。本发明提供的应用为研制开发促心肌分化的新型药物奠定了基础，所述神经鞘氨醇磷酸胆碱还可作为一种有效的工具，用于内源心脏干细胞的分化的分子机制的研究。

摘要： 本发明公开了一种神经鞘氨醇磷酸胆碱在制备促内源心脏干细胞分化为心脏谱系细胞药物中的应用；其中有效促进内源心脏干细胞分化为心脏谱系细胞的神经鞘氨醇磷酸胆碱(SPC)浓度为5μM。本发明提供的应用为研制开发促心肌分化的新型药物奠定了基础，所述神经鞘氨醇磷酸胆碱还可作为一种有效的工具，用于内源心脏干细胞的分化的分子机制的研究。

摘要： 本公开的实施例涉及与从儿童或新生个体获得的包含心脏干细胞的特定永生化细胞有关的组合物和使用方法。在具体实施例中，所述永生化细胞或来自所述细胞的条件培养基或其部分或总分泌组以有效量单独或与心脏干细胞组合提供给有需要的个体。