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miR-133a-3p靶向调控VCP基因对人骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响

         
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目的 探讨微小RNA-133a-3p(miR-133a-3p)靶向调控含缬酪肽蛋白(VCP)基因对人骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响.方法 体外培养人骨肉瘤细胞株MG63、U2OS(以下分别称MG63、U2OS细胞)及人成骨细胞系hFOB1.19(以下称hFOB1.19细胞),采用RT-qPCR法检测MG63、U2OS和hFOB1.19细胞miR-133a-3p相对表达量,选择miR-133a-3p相对表达量最低的骨肉瘤细胞进行后续实验.采用Lipofectamine3000瞬时转染技术,将miR-133a-3p mimic、miRNA NC转染上述骨肉瘤细胞,分别设为观察组与对照组,采用RT-qPCR法鉴定转染效率.取两组转染48 h细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖能力,采用细胞划痕实验检测细胞迁移能力,采用Transwell小室实验检测细胞侵袭能力.运用生物信息学预测数据库TargetScanhuman7.2(http://www.targetscan.org/),确定miR-133a-3p和VCP的结合位点,采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-133a-3p与VCP的靶向调控关系.取两组转染48 h细胞,采用Western blotting法检测VCP蛋白表达.结果 MG63、U2OS细胞miR-133a-3p相对表达量均低于hFOB1.19细胞,且U2OS细胞miR-133a-3p相对表达量低于MG63细胞(P均<0.05),故选择U2OS细胞进行后续实验.观察组miR-133a-3p相对表达量明显高于对照组(P<0.05).观察组细胞增殖、迁移和侵袭能力均低于对照组(P均<0.05).在TargetScanhuman7.2数据库中搜索VCP潜在的目标基因,结果发现miR-133a-3p在VCP基因3′非翻译区77～83 bp处有且仅有1个保守结合位点.双荧光素酶报告基因实验证实,miR-133a-3p与VCP呈负向调控关系,VCP是miR-133a-3p的靶基因.转染48 h,观察组VCP蛋白相对表达量低于对照组(P<0.05).结论 miR-133a-3p通过负向调控VCP基因,抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力.

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