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融合蛋白Tandab(CD3/CD19/4-1BBL)介导的T细胞对B细胞淋巴瘤细胞杀伤作用观察

         
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目的 观察融合蛋白Tandab(CD3/CD19/4-1BBL)介导的T细胞对人B细胞淋巴瘤细胞Raji的杀伤作用.方法 采用常规酶切、连接等分子克隆方法构建慢病毒表达载体pLentiR.SV40-Tandab(CD3/CD19/4-1BBL),将其瞬时转染至293T细胞,收集培养上清并纯化融合蛋白Tandab(CD3/CD19/4-1BBL).采用流式细胞术分析Tandab(CD3/CD19/4-1BBL)与CD19+细胞(Raji细胞)、CD3+细胞(人急性T淋巴细胞白血病细胞Jurkat)、4-1BB+细胞(Jurkat细胞)的结合活性.收集Raji细胞,按照效靶比20:1加入T细胞,分别加入0.08、0.8、8 pmol/mL的Tandab(CD3/CD19/4-1BBL)、Tandab(CD3/CD19)、4-1BBL,采用LDH释放实验测算T细胞对Raji细胞的杀伤效率,采用ELISA法检测8 pmol/mL融合蛋白作用后细胞培养液上清中的IL-2、采用流式细胞术检测CD3+CD69+细胞、CD3+CD25+细胞比例.结果 pLentiR.SV40-Tandab(CD3/CD19/4-1BBL)构建成功,表达的融合蛋白Tandab(CD3/CD19/4-1BBL)可与CD19+、CD3+、4-1BB+细胞结合.Tandab(CD3/CD19/4-1BBL)组、Tandab(CD3/CD19)组T细胞对Raji细胞杀伤百分比均高于4-1BBL组(P均<0.01).在效靶比一定时,随着融合蛋白Tandab浓度增高,T细胞对Raji细胞的杀伤百分比逐渐增高(P均<0.01).Tandab(CD3/CD19/4-1BBL)组、Tandab(CD3/CD19)组、4-1BBL组细胞培养液上清中的IL-2水平均高于PBS组(P均<0.05).Tandab(CD3/CD19/4-1BBL)组、Tandab(CD3/CD19)组CD3+CD69+细胞、CD3+CD25+细胞比例高于4-1BBL组、PBS组(P均<0.01).结论 融合蛋白Tandab(CD3/CD19/4-1BBL)可有效介导T细胞对B细胞淋巴瘤细胞的杀伤作用.

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