HPLC MALDI-TOF质谱法检测IFN-α2b二硫键结构

张平

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目的采用TPCK胰酶酶切、高效液相色谱(HPLC)法与MALDI-TOF MS质谱法联用解析重组人干扰素α2b(recombinant human interferon α2b,rhIFN-α2b)的二硫键连接位置;建立活性多肽/蛋白质二硫键连接位置定位的分析方法.方法首先验证rhIFN-α2b是否有游离半胱氨酸,然后通过TPCK胰蛋白酶酶切rhIFN-α2b蛋白质,HPLC-RPC法分离酶切样品并按峰分别收集各个肽段样品;采用质谱解析分子量和二次质谱肤段氨基酸系列测序,获得rhIFN-α2b的胰酶肽图;比对还原型与非还原型的胰酶肽图,找出差异肽段,并于理论胰酶酶切肽段比较,最终确定rhIFN-α2b的二硫键位置.结果 rhIFN-α2b的二硫键位置与文献报道的天然人干扰素α2b的二硫键位置一致,为Cys1-Cys98、Cys29-Cys138.结论建立了胰酶酶切、高效液相色谱(HPLC)法与MALDI-TOF MS质谱法联用测定活性多肽/蛋白质二硫键的分析方法,为今后蛋白质类药物的二硫键位置定位提供可靠分析手段.

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来源
《海峡药学》 |2016年第5期|65-69|共5页
作者
张平;
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作者单位

厦门特宝生物工程股份有限公司厦门361003;

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正文语种 chi
中图分类产品检验及分析鉴定;
关键词
IFN-α2b; MALDI-TOF MS; 二硫键; HPLC;

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