治疗性双质粒HBV DNA疫苗的体外转染表达与鉴定

饶桂荣; 刘惠萍; 何晓嫱; 杨富强; 莫国玉; 陈光明

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治疗性双质粒HBV DNA疫苗的体外转染表达与鉴定

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目的:探讨治疗性双质粒HBVDNA疫苗转染COS-7细胞后目的基因的表达情况.方法:以脂质体转染试剂Lipofectamine TM 2000介导,将带有preS2+S基因的重组疫苗质粒pS2.S和带有hIL2+hIFNγ融合基因的重组佐剂质粒pFP分别转染COS-7细胞,同时设立空质粒转染和未转染细胞为对照组,于转染后24,48,72,96 h采用ELISA法检测细胞培养上清的HBsAg、融合蛋白白细胞介素(IL-2)及干扰素(IFN-γ)的表达,并测定融合蛋白的IL-2、IFN-γ活性,采用ECL Western blotting分析和鉴定目的蛋白preS2+S、IL-2及IFN-γ的分子质量大小.结果:双质粒在转染COS-7细胞后不同时间均可进行分泌表达,且48 h时目的蛋白的表达量达峰值,其中表达的融合蛋白具有较高的IL-2和IFN-γ的生物学活性,pS2.S和pFP的转染上清分别在30.6 ku和110 ku处有特异性阳性反应条带.结论:HBVDNA疫苗质粒pS2.S和佐剂质粒pFP在COS-7细胞的最佳表达时间是转染后48 h,并鉴定双质粒表达产物的分子质量大小分别为30.6 ku和110 ku.

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来源
《天津医药》 |2006年第3期|145-147|共3页
作者
饶桂荣; 刘惠萍; 何晓嫱; 杨富强; 莫国玉; 陈光明;
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作者单位

510600,广州解放军第458医院全军肝病中心;

510600,广州解放军第458医院全军肝病中心;

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510600,广州解放军第458医院全军肝病中心;

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正文语种 chi
中图分类临床医学;
关键词
肝炎疫苗,乙型; 疫苗,DNA; 转染; 质粒;

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