伪狂犬病病毒Ea株EP0基因的克隆序列分析及其在大肠杆菌中的表达

方六荣; 陈焕春; 肖少波; 马相如; 王革飞

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伪狂犬病病毒Ea株EP0基因的克隆序列分析及其在大肠杆菌中的表达

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以伪狂犬病病毒Ea株 (PRV Ea)细胞感染物为模板 ,PCR扩增出 1.2 3kb的EP0基因完整编码区片段 ,将该基因片段克隆到 pBluescriptⅡsk +中并构建三个测序质粒 ,双脱氧末端终止法序列测定并同国外InFh株进行同源比较 ,发现PRV EaEP0基因存在多处点突变和一处缺失突变 ,但无插入突变和移码。进一步将该片段插入到原核表达载体 pET 2 8a的His Tag下游 ,构建的原核表达质粒pETEP0在大肠杆菌BL2 1(DE3)中获得了高效表达 ,SDS PAGE结果显示 ,表达的蛋白分子量为 6 2kD ,并形成包涵体。Western印迹分析表明 ,该蛋白带能与Ea株野毒高免血清发生特异性反应 ,证实PRV EaEP0基因在BL2 1(DE3)中获得了正确表达 ,并且具有免疫学活性。为今后深入研究该基因的功能奠定了基础。

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来源
《中国病毒学：英文版》 |2001年第2期|183-187|共5页
作者
方六荣; 陈焕春; 肖少波; 马相如; 王革飞;
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作者单位

华中农业大学牧医学院动物病毒室;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类 S852.659.1;
关键词
伪狂犬病病毒; EP0基因克隆; 序列分析; 表达;

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