丙型肝炎病毒包膜蛋白E2可溶性单链可变区抗体在大肠杆菌中的表达

成军; 施双双; 钟彦伟; 夏小兵; 王刚; 王琳; 刘妍; 陈菊梅

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利用分子生物学技术 ,构建表达丙型肝炎病毒 (HCV)包膜蛋白E2的人源单链可变区抗体 (ScFv)的原核表达载体 ,并在大肠杆菌JM10 9中表达可溶性的HCV E2 ScFv。以重组的HCVE2蛋白为包被抗原 ,利用噬菌体抗体库的表面展示技术 ,筛选到含有HCV E2 ScFv基因的噬菌体克隆 ,从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒 ,经Ncol/NotI酶切鉴定后 ,该ScFv基因由 75 0bp组成 ,将其亚克隆到pCANTAB5E载体中 ,转化大肠杆菌JM10 9,提取质粒进行DNA序列测定 ,符合ScFv的基因结构特点。IPTG诱导转化的大肠杆菌JM10 9,在其培养上清中获得了可溶性HCVE2单链可变区抗体的表达。酶联免疫吸附法 (ELISA)证实表达的HCV E2 ScFv具有与重组HCVE2蛋白的反应活性和特异性 ,对转化的JM10 9大肠杆菌上清中表述的HCV E2 ScFv进行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) ,证实表达的HCV E2 ScFv的分子量为 2 8kD。为应用HCV E2 ScFv进行肝组织免疫组织化学和细胞内免疫基因治疗研究奠定了基础。

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来源
《中国病毒学：英文版》 |2001年第3期|220-223|共4页
作者
成军; 施双双; 钟彦伟; 夏小兵; 王刚; 王琳; 刘妍; 陈菊梅;
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作者单位

解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心;

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正文语种 chi
中图分类免疫遗传学;
关键词
丙型肝炎病毒; 包膜蛋白; 单链可变区抗体; 表达; 大肠杆菌;

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