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首页> 美国卫生研究院文献>Acta Crystallographica Section F: Structural Biology and Crystallization Communications >Use of differential scanning fluorimetry to optimize the purification and crystallization of PLP-dependent enzymes
【2h】

Use of differential scanning fluorimetry to optimize the purification and crystallization of PLP-dependent enzymes

机译：使用差示扫描荧光法优化PLP依赖性酶的纯化和结晶

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Differential scanning fluorimetry (DSF) is a practical and accessible technique that allows the assessment of multiphasic unfolding behavior resulting from subsaturating binding of ligands. Multiphasic unfolding is indicative of a heterogenous protein solution, which frequently interferes with crystallization and complicates functional characterization of proteins of interest. Along with UV–Vis spectroscopy, DSF was used to guide purification and crystallization improvements for the pyridoxal 5′-phosphate (PLP) dependent transaminase BioA from Mycobacterium tuberculosis. The incompatibility of the primary amine-containing buffer 2-amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol (Tris) and PLP was identified as a significant contributor to heterogeneity. It is likely that the utility of DSF for ligand-binding assessment is not limited to the cofactor PLP but will be applicable to a variety of ligand-dependent enzymes.
机译：差示扫描荧光法（DSF）是一种实用且可访问的技术，可用于评估由于配体结合不饱和而导致的多相展开行为。多相展开指示异质蛋白质溶液，该溶液经常干扰结晶并使目标蛋白质的功能表征复杂化。 DSF与UV-Vis光谱一起，用于指导结核分枝杆菌中依赖于吡the醛5'-磷酸（PLP）的转氨酶BioA的纯化和结晶改进。含伯胺的缓冲液2-氨基-2-（羟甲基）-1,3-丙二醇（Tris）和PLP的不相容性被认为是造成异质性的重要因素。 DSF用于配体结合评估的效用可能不限于辅因子PLP，而是可应用于多种配体依赖性酶。

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