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Susceptibility of influenza A(H1N1)/pdm2009 seasonal A(H3N2) and B viruses to Oseltamivir in Guangdong China between 2009 and 2014

机译：2009年至2014年间甲型H1N1 / pdm2009流感季节性A（H3N2）和B型流感病毒对广东省的Oseltamivir易感性

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摘要

Nasopharyngeal swabs were collected from patients through the influenza surveillance network of the CDC of Guangdong. All specimens between 2009 and 2014 were checked for influenza virus using MDCK cells and further subtyped. Of those collected, 542 H1N1pdm09, 230 A(H3N2)and 448 B viruses selected at random were subjected to fluorescence-based NAI assays. Viral RNA was extracted from resistant isolates, and their NA genes were amplified by RT-PCR. Alignment of nucleotides and amino acids was performed. We performed structural modelling and simulations of mutants using Modeller 9.x and AutoDock and analyzed conformations and binding affinities. All tested seasonal type B and H3N2 viruses from 2009 to 2014 remained sensitive to oseltamivir. However, there were five strains (out of 198 tested isolates acquired between June and September 2013) that were resistant to oseltamivir. Another three resistant strains were identified among isolates from March to April 2014. We found that 2013/2014 oseltamivir-resistant strains and 2012/2013/2014 oseltamivir-sensitive strains had all or some of the following mutations: N44S, N200S,V241I, I321V,N369K, N386 K and K432E. MutationsV241I, N369K, N386K and K432E, alone or in conjunction with H275Y, had a significant impact on the binding pattern and affinity of oseltamivir for neuraminidase, rendering neuraminidase less susceptible.
机译：通过广东省疾病预防控制中心的流感监测网络从患者收集鼻咽拭子。使用MDCK细胞检查了2009年至2014年之间的所有标本的流感病毒，并进行了进一步亚型化。从随机选择的542株H1N1pdm09、230 ^ A（H3N2）和448 B病毒中进行基于荧光的NAI分析。从抗性分离株中提取病毒RNA，并通过RT-PCR扩增其NA基因。进行核苷酸和氨基酸的比对。我们使用Modeller 9.x和AutoDock进行了突变体的结构建模和模拟，并分析了构象和结合​​亲和力。从2009年到2014年，所有测试过的季节性B型和H3N2季节性病毒都对奥司他韦敏感。但是，有五株对奥司他韦具有抗药性的菌株（在2013年6月至2013年9月间获得的198株经测试的菌株中）。从2014年3月至2014年4月在菌株中鉴定出另外三株耐药菌株。我们发现2013/2014 oseltamivir耐药菌株和2012/2013/2014 oseltamivir敏感菌株均具有以下全部或部分突变：N44S，N200S，V241I，I321V ，N369K，N386 K和K432E。突变V241I，N369K，N386K和K432E单独或与H275Y结合使用，对奥司他韦对神经氨酸酶的结合模式和亲和力具有重大影响，使神经氨酸酶的敏感性降低。

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